Chapitre II
matériels et méthodes
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2.4.2.4. Dénombrement des Streptocoques fécaux :
Principe
La méthode utilisée pour la détermination des Streptocoques est la méthode de fermentation
en tubes multiples qui est basée sur l’ensemencement d’une série de trois tubes contenant des
milieux de culture liquides, puis sur la détermination du nombre le plus probable à partir des
tubes positifs en se référant à la table de trois tubes des probabilités NPP de Mc Grady
(Rodier et al., 2005)
La technique de recherche des Streptocoques fécaux nécessite deux tests consécutifs (figure
n° 17) (Rodier et al., 2005) :
a. Test présomptif
Il s’agit d’ensemencer une série de tubes contenant le milieu de Rothe en simple et double
concentration à partir des échantillons et dilutions d’eau de mer à analyser. Ce milieu contient
de l’azide de sodium qui est considéré comme agent sélectif pour la recherche des
streptocoques (Rodier et al, 2005).
L’ensemencement
1
ère série : 10 ml d’eau de mer dans les 3 tubes de milieu de Rothe double concentration.
2
eme série : 1 ml d’eau de mer dans les 3 tubes de milieu de Rothe simple concentration.
3
eme série : 0.1 ml d’eau de mer dans les 3 tubes de milieu de Rothe simple concentration.
L’incubation se fait à 37° C pendant 24h. Les tubes présentant un trouble sont présomptifs de
la présence des Streptocoques fécaux et seront soumis au test confirmatif.
b. Test confirmatif
Chaque tube de Rothe positif est ensemencé sur le milieu d’Eva Litsky qui contient non
seulement de l’azide de sodium mais également de l’éthyle violet, donc c’est un milieu plus
sélectif qui permet de confirmer la présence des Streptocoques fécaux. L’incubation
s’effectue pendant 24h à 37° C.
Les tubes présentant un trouble accompagnés ou non d’une pastille violette au fond du tube
confirment la présence des streptocoques fécaux. Les résultats sont exprimés en nombre de
NPP des streptocoques par 100 ml d’eau de mer à analyser en se référent à la table des NPP
(Rodier et al., 2005).