Chapitre II
Matériels et méthodes
29
A=D.O= log (I 0 /I) = Ɛ .L.C
Principe de dosage des sels nutritifs
La méthode utilisée pour le dosage des sels nutritifs (ammonium, nitrites, nitrates,
orthophosphates et silicates) est basée sur une réaction de coloration. En effet, ces sels
réagissent dans certaines conditions (température, pH, présence de catalyseurs,…) avec des
réactifs spécifiques pour donner une coloration absorbant la lumière à une certaine longueur
d’onde (λ).
L’absorbance de l’énergie lumineuse dépend de l’intensité de la coloration, de même, ce
dernier est d’autant plus importante que la solution est concentrée en sel dosé.
La quantité de lumière absorbée par la solution, appelée absorbance (A) ou densité optique
(D.O), obéit à la loi de BEER-LAMBERT qui est exprimée par la relation suivante :
I 0 et I: sont respectivement les intensités lumineuses incidentes et émergentes du milieu
absorbant.
Ɛ : le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur.
L : la longueur du milieu traversé exprimé en cm.
C : concentration de la solution absorbante exprimée en mol/l.
D.O : densité optique de la solution.
2.4.1.1. Dosage de l’ammonium
Le dosage de l’ammonium (NH 4
+
) est réalisé suivant la méthode de Koroleff (1969) in
(AMINOT et CHAUSSEPIED, 1983).
En milieu alcalin (8< pH<11,5), l’ammonium dissous réagit sur l’hypochlorite pour former
une monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d’un excès d’hypochlorite
(milieu oxydant) donne lieu à la formation d’un bleu d’indophénol. La réaction est catalysée
par le nitroprussiate de sodium. Le maximum d’absorption se fait à une longueur d’onde de
630 nm.
2.4.1.2. Dosage des nitrites
Les nitrites (NO 2
-
) forment un diazoïque par action avec le sulfamide en milieu acide pH<2.
Ce composé formera ensuite en présence de N-naphylethylènediamine un composé azoïque de
couleur rose absorbant la lumière à 450 nm (BENSCHNEIDER et ROBINSON, 1952).
2.4.1.3. Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO 3
-
) en nitrites (NO
-
2 ) par le passage de
l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (WOOD et al.,
1967). Les nitrites (en réalité NO 2
-
+ NO 3
-
réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon
la méthode précédemment décrit. Il suffira alors d’en déduire la concentration de nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (RODIER et al., 1996).
Matériels et méthodes
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A=D.O= log (I 0 /I) = Ɛ .L.C
Principe de dosage des sels nutritifs
La méthode utilisée pour le dosage des sels nutritifs (ammonium, nitrites, nitrates,
orthophosphates et silicates) est basée sur une réaction de coloration. En effet, ces sels
réagissent dans certaines conditions (température, pH, présence de catalyseurs,…) avec des
réactifs spécifiques pour donner une coloration absorbant la lumière à une certaine longueur
d’onde (λ).
L’absorbance de l’énergie lumineuse dépend de l’intensité de la coloration, de même, ce
dernier est d’autant plus importante que la solution est concentrée en sel dosé.
La quantité de lumière absorbée par la solution, appelée absorbance (A) ou densité optique
(D.O), obéit à la loi de BEER-LAMBERT qui est exprimée par la relation suivante :
I 0 et I: sont respectivement les intensités lumineuses incidentes et émergentes du milieu
absorbant.
Ɛ : le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur.
L : la longueur du milieu traversé exprimé en cm.
C : concentration de la solution absorbante exprimée en mol/l.
D.O : densité optique de la solution.
2.4.1.1. Dosage de l’ammonium
Le dosage de l’ammonium (NH 4
+
) est réalisé suivant la méthode de Koroleff (1969) in
(AMINOT et CHAUSSEPIED, 1983).
En milieu alcalin (8< pH<11,5), l’ammonium dissous réagit sur l’hypochlorite pour former
une monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d’un excès d’hypochlorite
(milieu oxydant) donne lieu à la formation d’un bleu d’indophénol. La réaction est catalysée
par le nitroprussiate de sodium. Le maximum d’absorption se fait à une longueur d’onde de
630 nm.
2.4.1.2. Dosage des nitrites
Les nitrites (NO 2
-
) forment un diazoïque par action avec le sulfamide en milieu acide pH<2.
Ce composé formera ensuite en présence de N-naphylethylènediamine un composé azoïque de
couleur rose absorbant la lumière à 450 nm (BENSCHNEIDER et ROBINSON, 1952).
2.4.1.3. Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO 3
-
) en nitrites (NO
-
2 ) par le passage de
l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (WOOD et al.,
1967). Les nitrites (en réalité NO 2
-
+ NO 3
-
réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon
la méthode précédemment décrit. Il suffira alors d’en déduire la concentration de nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (RODIER et al., 1996).