Chapitre 3
Matériel et Méthode
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ε : Le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur
d’onde ;
L : La longueur du milieu traversé exprimé en cm ;
C : concentration de la solution absorbante exprimée en mole/l ;
A : absorbance de la solution ;
D.O : Densité optique de la solution.
Cette loi, permet de définir l’absorbance en fonction de la concentration, en effectuant les
mesures d’absorbance pour diverses concentrations.
La courbe d’étalonnage permet ensuite de déterminer la concentration du sel nutritif de
l’échantillon par mesure de son absorbance et reporter sur le graphe Abs =f (c).
3.1.7.2.1 Dosage‎d’Ammonium
3.1.7.2.1.1 Principe de la méthode
La méthode décrite, mesure la totalité de l’azote ammoniacal, soit N-NH 3 +N-NH 4
+ .
Il s’agit de la méthode Koroleff (1969). Dans un premier temps, l’ammoniac forme une
monochloramine avec l’hypochlorite en milieu légèrement basique. Cette dernière réagit
avec le phénol en présence d’un excès d’hypochlorite pour former le bleu d’indo-phénol
qui est absorbé à 630 nm.
3.1.7.2.1.2 Calcul et expression des résultats
- Les absorbances
Atr: Absorbance mesurée pour l’échantillon traité (après correction du blanc des cuves).
b t : Absorbance mesurée pour la turbidité (après correction des blancs des cuves).
b r : Absorbance mesurée pour le blanc des réactifs (après correction des blancs des cuves).
A = Atr– b t – b r
Pour chaque élément nutritifs, reportée sur la courbe d’étalonnage pour en déduire la
concentration de l’échantillon.