Chapitre III : MATERIELS ET METHODES
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La purification a pour but la rétention des composés lipidiques co-extraits avec les
hydrocarbures.
Le fractionnement est une étape de séparation entre la fraction aliphatique (F 1 )et la fraction
des hydrocarbures polyaromatiques(F 2 ).
 Préparation de la colonne chromatographique
 Peser 5g de gel de silice et 5g d’alumine dans des béchers propres ;
 Placer la burette avec son robinet sur la potence ;
 Prendre un peu de laine de verre par une pince et la mettre au fond de la burette à
l'aide d'une tige en verre ;
 Verser un peu d’Hexane pour le conditionnement de la burette ;
 Préparer un mélange d’hexane + 5g de gel de silice et un mélange d’hexane + 5g
d’alumine, les laisser couler en récupérant l’hexane, sans laisser la colonne sécher ;
 Ajouter une pincé de Na 2 SO 4 dans la burette et faire tasser pour l’absorption des
gouttelettes d’eau ;
 Laisser environ 1 ml au-dessus des adsorbants afin d'éviter leur séchage.
 Purification et fractionnement
• Verser l’échantillon dans la colonne ;
• Mesurer 20ml d’hexane à l’aide d’une éprouvette et les verser dans la burette ;
• Dans un tube à essai, propre et étiqueté, récupérer la fraction aliphatique (F 1 ) en
laissant toujours 1 ml pour éviter le séchage de la burette ;
• Mesurer 20 ml du mélange Hexane /Dichlorométhane (50/50) à l'aide d'une éprouvette
et le versé dans la colonne ;
• Récupérer la fraction aromatique (F 2 ) contenu de la burette dans un autre tube
conditionné et étiqueté ;
• Stoker les fractions ainsi obtenues dans le réfrigérateur, jusqu’à l’analyse.