Annexes
4. Décapsulation
Dès que les cystes hydratés seront mis dans la solution de décapsulation la réaction
exothermique des ions d’hypochlorite avec la chitine et les lipoprotéines du chorion, la
couleur des cystes changera graduellement.
Refroidir la solution au 15-20°C (en plaçant par exemple le bac de décapsulation dans
un bain rempli avec de l’eau). Vérifier la température régulièrement, puisque la réaction est
exothermique ; ne jamais dépasser les 40°C (si nécessaire ajouter de la glace a la solution de
décapsulation).
Vérifier le processus de décapsulation régulièrement sous loupe binoculaire.
5. Lavage et désactivation
Quand les cystes deviennent orange (avec le décolorant liquide) ou gris (avec le
décolorant en poudre), l’examen microscopique montre la dissolution presque complète de la
coquille du cystes (après 3 à 15 min).
Enlever les cystes de la suspension de décapsulation et rincer avec de l’eau sur un
tamis de 125 µm jusqu'à ce qu’aucune odeur de chlore ne soit détectée. Il est crucial de ne pas
laisser les embryons dans la solution de décapsulation plus longtemps puisque ceci affectera
leurs viabilités.
Pour la désactivation : il faut éliminer toutes traces d’hypochlorite en plongeant les
cystes (<1min) dans une solution de HCl de 0,1N ou dans la solution de Na 2 S 2 O 3 de 0,1 %,
puis les rincer avec de l’eau. Des résidus d’hypochlorite peuvent être détectés en mettant
quelques cystes décapsulés en petites quantités d’indicateur d’amidon-iodine, quand les
réactifs virent au bleu, le lavage et la désactivation doivent être poursuivis.
6. Stockage
Les cystes peuvent être stockés pendant quelques jours dans le réfrigérateur (0 à 4°C)
ou tout autre entreposage au froid avant l’incubation pour l’éclosion.
Pour l’entreposage a long termes, les cystes doivent être déshydratés dans une solution
de saumure saturée (1g de cystes secs par 10 ml de saumure a 300g de NaCl/L). La saumure
doit être renouvelé après 24h, leurs teneur en eau a été abaissé a environ 20% et ils peuvent
être stockés dans un réfrigérateur pendant plusieurs semaines sans perdre leurs viabilités.
4. Décapsulation
Dès que les cystes hydratés seront mis dans la solution de décapsulation la réaction
exothermique des ions d’hypochlorite avec la chitine et les lipoprotéines du chorion, la
couleur des cystes changera graduellement.
Refroidir la solution au 15-20°C (en plaçant par exemple le bac de décapsulation dans
un bain rempli avec de l’eau). Vérifier la température régulièrement, puisque la réaction est
exothermique ; ne jamais dépasser les 40°C (si nécessaire ajouter de la glace a la solution de
décapsulation).
Vérifier le processus de décapsulation régulièrement sous loupe binoculaire.
5. Lavage et désactivation
Quand les cystes deviennent orange (avec le décolorant liquide) ou gris (avec le
décolorant en poudre), l’examen microscopique montre la dissolution presque complète de la
coquille du cystes (après 3 à 15 min).
Enlever les cystes de la suspension de décapsulation et rincer avec de l’eau sur un
tamis de 125 µm jusqu'à ce qu’aucune odeur de chlore ne soit détectée. Il est crucial de ne pas
laisser les embryons dans la solution de décapsulation plus longtemps puisque ceci affectera
leurs viabilités.
Pour la désactivation : il faut éliminer toutes traces d’hypochlorite en plongeant les
cystes (<1min) dans une solution de HCl de 0,1N ou dans la solution de Na 2 S 2 O 3 de 0,1 %,
puis les rincer avec de l’eau. Des résidus d’hypochlorite peuvent être détectés en mettant
quelques cystes décapsulés en petites quantités d’indicateur d’amidon-iodine, quand les
réactifs virent au bleu, le lavage et la désactivation doivent être poursuivis.
6. Stockage
Les cystes peuvent être stockés pendant quelques jours dans le réfrigérateur (0 à 4°C)
ou tout autre entreposage au froid avant l’incubation pour l’éclosion.
Pour l’entreposage a long termes, les cystes doivent être déshydratés dans une solution
de saumure saturée (1g de cystes secs par 10 ml de saumure a 300g de NaCl/L). La saumure
doit être renouvelé après 24h, leurs teneur en eau a été abaissé a environ 20% et ils peuvent
être stockés dans un réfrigérateur pendant plusieurs semaines sans perdre leurs viabilités.