Chapitre III
MATERIELS ET METHODES
56
3.2.4. Techniques de caractérisation et d’identification de quelques bactéries
C’est un test qui permet la distinction entre deux groupes bactériens, les Gram + et les
Gram. Le mécanisme de cette coloration est connu. Le violet de gentiane se fixe sur des
composants cytoplasmiques et après un temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes.
Chez les bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le
mélange alcool + acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram
positif, la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré
en violet.
➢
Coloration de Gram
Un frottis fixé à la chaleur et coloré pendant une minute avec une solution de violet de
gentiane, le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-ioduré de Lugol, et il y
est maintenu pendant une minute. Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant
quelques secondes jusqu'à élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec
l’eau du robinet. Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est une solution de Fushine,
rincé rapidement au robinet et séché. Après ce traitement, les cellules Gram négatif
apparaissent roses et les cellules Gram positif apparaissent sous une couleur violette
(Singleton et Sainsbury, 1984).
➢
Test de la catalase
Cette enzyme catalyse la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H2O2) qui est
produit par certaines réactions cellulaires et est très toxiques, donc c’est l’une des enzymes
chargée d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (Pelmont, 1993). La réaction catalysée
est la suivante :
2H2O2 O2 + 2H2O
Le test de la catalase consiste essentiellement à ajouter du peroxyde d’hydrogène à des
bactéries : la présence de catalase donne lieu à l’apparition de bulles d’oxygène.
➢
Test d’oxydase
Ce test est réalisé à l’aide d’une plaque de marque « BD BBL Dryslide » contenant quatre
petits carrés pré-imprégné par une réactive et destiné chacun à tester une colonie bactérienne.
Ecraser, avec une effilure d’une pipette Pasteur, une colonie de germe à étudier sur le
petit carré. S’il y a apparition d’une tache violette au bout de 30 secondes, on pourra conclure
MATERIELS ET METHODES
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3.2.4. Techniques de caractérisation et d’identification de quelques bactéries
C’est un test qui permet la distinction entre deux groupes bactériens, les Gram + et les
Gram. Le mécanisme de cette coloration est connu. Le violet de gentiane se fixe sur des
composants cytoplasmiques et après un temps de coloration, toutes les bactéries sont violettes.
Chez les bactéries à Gram négatif, la paroi, riche en lipides, laisse passer l'alcool (ou le
mélange alcool + acétone) qui décolore le cytoplasme alors que, chez les bactéries à Gram
positif, la paroi constitue une barrière imperméable à l'alcool et le cytoplasme demeure coloré
en violet.
➢
Coloration de Gram
Un frottis fixé à la chaleur et coloré pendant une minute avec une solution de violet de
gentiane, le frottis coloré est rincé rapidement avec une solution iodo-ioduré de Lugol, et il y
est maintenu pendant une minute. Le frottis est ensuite décoloré avec l’alcool à 95 % pendant
quelques secondes jusqu'à élimination de l’excès du colorant puis rincé immédiatement avec
l’eau du robinet. Le frottis est ensuite traité avec un colorant qui est une solution de Fushine,
rincé rapidement au robinet et séché. Après ce traitement, les cellules Gram négatif
apparaissent roses et les cellules Gram positif apparaissent sous une couleur violette
(Singleton et Sainsbury, 1984).
➢
Test de la catalase
Cette enzyme catalyse la décomposition du peroxyde d’hydrogène (H2O2) qui est
produit par certaines réactions cellulaires et est très toxiques, donc c’est l’une des enzymes
chargée d’éponger l’eau oxygénée par la dismutation (Pelmont, 1993). La réaction catalysée
est la suivante :
2H2O2 O2 + 2H2O
Le test de la catalase consiste essentiellement à ajouter du peroxyde d’hydrogène à des
bactéries : la présence de catalase donne lieu à l’apparition de bulles d’oxygène.
➢
Test d’oxydase
Ce test est réalisé à l’aide d’une plaque de marque « BD BBL Dryslide » contenant quatre
petits carrés pré-imprégné par une réactive et destiné chacun à tester une colonie bactérienne.
Ecraser, avec une effilure d’une pipette Pasteur, une colonie de germe à étudier sur le
petit carré. S’il y a apparition d’une tache violette au bout de 30 secondes, on pourra conclure