Chapitre III
MATERIELS ET METHODES
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2.3.1 Dénombrement des coliformes, des streptocoques fécaux
Dans notre étude nous avons opté pour la méthode de filtration sur membrane pour
estimer la charge bactérienne dans la zone d’étude. C’est la méthode de concentration la plus
utilisée au laboratoire, pour sa facilité et sa reproductibilité. Elle consiste à recueillir, sur une
membrane stérile un volume donné de produits à analyser (eau usée, eau de consommation et
eau de mer). La membrane est ensuite déposée sur un milieu nutritif convenable : âpres
incubation les colonies sont dénombrées et identifiées (Champiat et Larpent ,1994).
2.3.1.1
Matériel
- Dispositif de filtration (Photo 17).
- Bec-Bunsen pour garder tout au long de la manipulation la zone de travail stérile ;
- Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe ;
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles (en emballage
individuel) de porosité de 0.45μm et de 47 mm de diamètre susceptibles de retenir les
bactéries.
- Deux Incubateurs (Etuves l’une réglée à 37°C et
l’autre à 44°C) ;
- Pompe à vide ;
- Pinces stérilisées et Pipettes.
2.3.1.2
Mode opératoire
- Stériliser le dispositif de filtration ;
- Mettre en place le dispositif ;
- Mettre le filtre sur la grille ;
- Filtrer un volume d’échantillon (100ml) ;
- Déposer le filtre sur le milieu de culture adapté pour chaque bactérie recherchée;
- Incuber les boites à la température adéquate.
La composition des milieux de culture et des réactifs utilisés est consignée (annexe
VI).
Photo 9: Dispositif de filtration sur
membrane