Chapitre III
Matériels et Méthodes
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La mesure de la concentration en chlorophylle « a », les phéopigments, est décrite selon deux
méthodes de mesure spectroscopiques : la spectrophotométrie utilisée en 2017 et la fluorimétrie
utilisées en 2011 et 2012 (Annexe II).
3.1 Méthode par spectrométrie d’absorption moléculaire
3.1.1. Principe de la méthode
L’échantillon est filtré après leur prélèvement et la filtration devra être réalisée à très faible lumière.
Les filtres subiront une extraction à l’acétone (90 %). La concentration de chlorophylle a est
déterminée en mesurant l’absorption de la lumière avant et après acidification.
3.2. Matériel et appareillage
 Dispositif de filtration et des filtres GF/F 0,7 μm de porosité.
 Tubes de d’extraction de 10ml.
 Centrifugeuse de marque SIGMA.
 Spectrophotomètre fluorescence, modèle JASCO V-730.
 Matériels courant de laboratoire.
3.3. Réactifs
 Solvant d'extraction : acétone à 90%.
 Solution d'acide chloridrique 0,3N.
3.4. Mode opératoire
3.4.1. Filtration et conservation
Dès le retour au laboratoire les échantillons sont homogénéiser et filtrés le plus rapidement
Une fois la filtration terminée, le filtre est prélevé et plié en quatre à l’aide des pinces et enrobé dans
un papier d’aluminium préalablement étiqueté et placer au congélateur.
3.4.2. Extraction des pigments
- Verser 5ml d’acétone à 90% dans le tube recouvert par papier aluminium puis introduire le
Filtre et déchiqueter le filtre à l'aide d'une baguette.
- Rajouter 5ml et fermer le tube.