Annexe II
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 la filtration des échantillons d’eau de mer prélevés s’est faite sur des filtres en fibre de
verre après l’ajout de quelques gouttes de MgCO3.
 Immédiatement après la filtration, le filtre est plié sur quatre et enrobé dans du papier
aluminium déjà étiqueté. Ensuite les filtres sont conservés dans un congélateur à – 20
C°.
 Mettre le filtre dans le tube à centrifuger, ajouter 10 ml du solvant d’extraction
(acétone à 90%).
 Déchiqueter le filtre à l'aide d'une baguette ou d'un tube de verre à extrémité coupante,
boucher et agiter pour disperser les fibres.
 Laisser l'extraction acétonique se poursuivre une nuit au réfrigérateur.
 Une fois l'extraction terminée, et peu avant la mesure, centrifuger les extraits dans une
centrifugeuse.
 Centrifuger les tubes (bouchés) durant 3 minutes, puis les sortir de la centrifugeuse et
faire tomber les fibres de verre qui adhérent à la paroi, au-dessus de la surface du
solvant, par un léger mouvement d'agitation (ne pas remettre en suspension les fibres
déjà agglomérées dans le fond).
 Centrifuger à nouveau 5 à 10 min à 3 000-4 000 tours par minute.
 Remplir la premier cuve avec la solution d’extraction (Acétone) pour faire l’auto zéro
lors du changement de la longueur d’onde.
 Rincer plusieurs fois la cuve au solvant d’extraction.
 Transférer le surnageant de centrifugation dans la cuve du spectrophotomètre (par
aspiration avec une seringue).
 Mesurer les absorbances brutes de l'extrait non acidifié aux longueurs d'ondes de 665
et 750 nm : A
NA
665BRUT et B
NA
BRUT
 Sortir la cuve et ajouter (directement dans la cuve) l'acide chlorhydrique 0,3 mol/1 à
raison de 10 à 20 µl par millilitre d'extrait. Boucher, agiter et replacer précisément la
cuve.
 Laisser agir l'acide entre 2 et 5 min (mais pas plus).
 Mesurer à nouveau les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm :
A
A
665brut et B
A
brut.