Chapitre 3 : Matériels et méthodes
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 Sortir les tubes du réfrigérateur. Agiter les tubes
 Centrifuger 5min à 3000tours /min
 Remettre en suspension les morceaux de filtre qui se sont déposés sur les parois du
tube
 Centrifuger à nouveau 10min
 Prélever alors le surnageant et le transférer dans un tube de mesure .mesurer la
fluorescence F 0
Rajouter entre 10 et 20µl d’HCL 0,3N par ml d’extrait acétonique (1à 5minute après l’ajout
d’acide).
Agiter et mesurer la fluorescence F a quand le signal est stable.
NB : toutes les étapes de la mesure ont été réalisées à labri de la lumière.
 Etalonnage
Le blanc constitué d’acétone à 90 % est mesurée avant chaque série d’échantillon .il
permet de régler le zéro de l’appareil.
 Calcul et expression des résultats
*
+,
-
(
)
⁄
Où :
V : volume d’eau filtré en (litre)
v : volume d’acétone en (millilitre)
L : longueur du chemin optique de la cuve de mesure (1cm)
Avec
A665na= Ab665na-Ab750na
A665a=Ab665a-Ab750a
Aussi
Ab665na = Absorbance à 665nm avant acidification
Ab665a= Absorbance à 665nm après acidification