TROISIEME CHAPITRE : RESULTATS ET DISCUSSION
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al., 1993a) et les métaux (Labrot et al., 1996). La catalase est fréquemment utilisée comme un
biomarqueurs de stress oxydatif dans les études écotoxicologiques.
5.2.1.1.1. Dosage
La réaction s'effectue dans une cuve de spectrophotomètre en quartz. Dans la cuve essai
placer dans l'ordre :
Tableau III. 3 : la réaction de spectrophotomètre
Dans la cuve (dans l'ordre)
ESSAI
BLANC
Tampon phosphate 100 mM, pH 7.4 à 25°C
750 µl
800 µl
H2O2 500 mM (soit 100 mM dans la cuve)
200 µl
200 µl
S9 (1 à 1.5 mg prot/ml)
50 µl
0 µl
Agiter 3 ou 4 fois et lancer la lecture au spectrophotomètre (réglages préenregistrés).
Température à 25°C.
Longueur d'onde 240 nm.
15 secondes de délai 30 secondes de lecture.
5.2.1.1.2. Réactifs à preparer
Tampon phosphate 100 M pH 7,4.
Eau oxygénée 500 mM (extemporanément).
1.42 ml eau oxygénée à 30 volumes (garder en chambre froide) amener à 25 ml avec tampon
phosphate 100 mM pH 7,4.
5.2.1.1.3. Calcul
On utilise le coefficient d'extinction moléculaire de l'eau oxygénée à 240 nm = 0.040 cm-1
.mmole-1.l.
[Protéine] = 0,19 mg\ml
Tableau III. 4 : Présentation de changement de l'absorption par unité de temps dans
l'échantillon
T0
T30
T60
T90
T120
1,700
1,624
1,577
1,533
1,502
DO\mn = 1,700-1,577
=0,123 nm\mn