DEUXIÉME CHAPITRE: MATERIELS ET MÉTHODES
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Tableau II. 1: la gamme d’étalonnage
- Incubation 10min a l’obscurité a temperature ambiante
- Lecture de la densité optique à 595nm
- Traçage de la droite qui passe par l’origine DO=f([BSA µg/ml])
- Détermination de la concentration de l’echantillon par extrapolation sur la courbe
etalon
5.3. Test catalase
Principe : Les catalases sont des enzymes qui interviennent dans la défense de la cellule
contre le stress oxydatif en éliminant les espèces réactives de l’oxygène (ERO) et en
accélérant la réaction spontanée de dismutation du peroxyde d’hydrogène (H2O2) toxique
pour la cellule en eau et en oxygène. La technique utilisée est celle décrite par Clairborne
(1985), elle consiste à suivre la disparition de l’eau oxygénée par action de la catalase selon la
réaction suivante:
Catalase
2 H 2 O 2
2 H 2 O + O 2
Suivi de l’activité enzymatique : Dans une cuve en quartz on introduit dans l’ordre :
On suit la diminution de la densité optique par spectrophotométrie à une longueur d’onde 240
nm.
Détermination de l’activité de la catalase : L’activité spécifique de la catalase est exprimée
en nmole. min-1. mg-1 de protéines et est déterminée à l’aide de la formule suivante :
Activité Catalase (nmole.min-1.mg-1 P) = (Δ DO / mn x 1000)/ (ε * V * P)
Δ DO/ mn = DO essai –DO blanc
V : volume de l’échantillon en ml.
P : mg de protéines par ml de la fraction à doser.
ε: Coefficient d’extinction molaire de peroxyde d’hydrogène 0.04 M.cm-1.
Tubes
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Quantité de BSA (µl)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
Quantité d’eau distillée (µl)
450 400 350 300 250 200 150 100 50 0
Quantité du réactif bradford (ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5
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Tableau II. 1: la gamme d’étalonnage
- Incubation 10min a l’obscurité a temperature ambiante
- Lecture de la densité optique à 595nm
- Traçage de la droite qui passe par l’origine DO=f([BSA µg/ml])
- Détermination de la concentration de l’echantillon par extrapolation sur la courbe
etalon
5.3. Test catalase
Principe : Les catalases sont des enzymes qui interviennent dans la défense de la cellule
contre le stress oxydatif en éliminant les espèces réactives de l’oxygène (ERO) et en
accélérant la réaction spontanée de dismutation du peroxyde d’hydrogène (H2O2) toxique
pour la cellule en eau et en oxygène. La technique utilisée est celle décrite par Clairborne
(1985), elle consiste à suivre la disparition de l’eau oxygénée par action de la catalase selon la
réaction suivante:
Catalase
2 H 2 O 2
2 H 2 O + O 2
Suivi de l’activité enzymatique : Dans une cuve en quartz on introduit dans l’ordre :
On suit la diminution de la densité optique par spectrophotométrie à une longueur d’onde 240
nm.
Détermination de l’activité de la catalase : L’activité spécifique de la catalase est exprimée
en nmole. min-1. mg-1 de protéines et est déterminée à l’aide de la formule suivante :
Activité Catalase (nmole.min-1.mg-1 P) = (Δ DO / mn x 1000)/ (ε * V * P)
Δ DO/ mn = DO essai –DO blanc
V : volume de l’échantillon en ml.
P : mg de protéines par ml de la fraction à doser.
ε: Coefficient d’extinction molaire de peroxyde d’hydrogène 0.04 M.cm-1.
Tubes
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Quantité de BSA (µl)
50 100 150 200 250 300 350 400 450 500
Quantité d’eau distillée (µl)
450 400 350 300 250 200 150 100 50 0
Quantité du réactif bradford (ml) 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5