CHAPITRE III
MATERIELS ET METHODES
40
2.5.1.2 Dénombrement des streptocoques fécaux
Comme test présomptif, le filtre est déposé sur un milieu Slanetz et Bartley, et incubé
à 37 °C pendant 24 à 48h. Les streptocoques donnent des colonies rouge-marron.
Pour le test confirmatif, le filtre est reporté à l’aide d’une pince stérile sur le milieu
BEA (Bile Esculine Agar), et incubé à 44 °C pendant 2h. Les colonies dénombrées sont
celles entourées d’un halo noir (RODIER et al., 2009)
Le nombre de colonies s’exprime en UFC/100ml d’eau analysée.
2.5.2 La recherche des bactéries pathogènes
2.5.2.1 La recherche des Salmonelles
Après avoir filtré 1000 ml d’échantillon d’eau de mer, le filtre est placé dans un milieu
SFB pour un premier enrichissement additionné de disques SFB, et incubé à 37 °C pendant
24h. Puis, un premier isolement a été effectué sur gélose SALMONELLA-SHIGELLA (SS),
ainsi qu’un 2
ème
enrichissement dans un tube contenant 10 ml d’SFB additionné de disques
SFB, après incubation à 37 °C pendant 24h, un 2
ème isolement a été effectué sur gélose (SS)
(RODIER et al., 2009).
Afin d’identifier le germe recherché à savoir salmonelle, on a repéré les colonies
suspectes (colonie incolore avec ou sans centre noir) sur lesquelles on a effectué des tests
biochimiques :
Test de la catalase
La catalase est une enzyme qui permet la dégradation de l’eau oxygénée (peroxyde
d’hydrogène) (H2O2) :
H2O2
H2O + ½ O2
Le test consiste à mettre une culture bactérienne en contact avec une solution d’eau
oxygénée. La catalase provoque un dégagement gazeux abondant sous forme de bulles, donc
la décomposition de l’eau oxygéné (GUIRAUD, 2003).
Test d’oxydase
L’oxydase est une enzyme présente dans certaines chaînes respiratoire cytochromiques
bactériennes (DELARRAS, 2008).
MATERIELS ET METHODES
40
2.5.1.2 Dénombrement des streptocoques fécaux
Comme test présomptif, le filtre est déposé sur un milieu Slanetz et Bartley, et incubé
à 37 °C pendant 24 à 48h. Les streptocoques donnent des colonies rouge-marron.
Pour le test confirmatif, le filtre est reporté à l’aide d’une pince stérile sur le milieu
BEA (Bile Esculine Agar), et incubé à 44 °C pendant 2h. Les colonies dénombrées sont
celles entourées d’un halo noir (RODIER et al., 2009)
Le nombre de colonies s’exprime en UFC/100ml d’eau analysée.
2.5.2 La recherche des bactéries pathogènes
2.5.2.1 La recherche des Salmonelles
Après avoir filtré 1000 ml d’échantillon d’eau de mer, le filtre est placé dans un milieu
SFB pour un premier enrichissement additionné de disques SFB, et incubé à 37 °C pendant
24h. Puis, un premier isolement a été effectué sur gélose SALMONELLA-SHIGELLA (SS),
ainsi qu’un 2
ème
enrichissement dans un tube contenant 10 ml d’SFB additionné de disques
SFB, après incubation à 37 °C pendant 24h, un 2
ème isolement a été effectué sur gélose (SS)
(RODIER et al., 2009).
Afin d’identifier le germe recherché à savoir salmonelle, on a repéré les colonies
suspectes (colonie incolore avec ou sans centre noir) sur lesquelles on a effectué des tests
biochimiques :
Test de la catalase
La catalase est une enzyme qui permet la dégradation de l’eau oxygénée (peroxyde
d’hydrogène) (H2O2) :
H2O2
H2O + ½ O2
Le test consiste à mettre une culture bactérienne en contact avec une solution d’eau
oxygénée. La catalase provoque un dégagement gazeux abondant sous forme de bulles, donc
la décomposition de l’eau oxygéné (GUIRAUD, 2003).
Test d’oxydase
L’oxydase est une enzyme présente dans certaines chaînes respiratoire cytochromiques
bactériennes (DELARRAS, 2008).