Annexes
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Les Annexes :
Annexe 1 : Etapes de la mesure :
Prélèvement : utilisation d’une bouteille niskin et des flacons opaques.
Filtration : elle doit être effectuée le plutôt possible après l’échantillonnage à l’aide de filtres
en fibres de verre (GF/F) de 0.7 µm de porosité.
Conservation des filtres : stockage a -20 c° voir plus selon la durée.
Extraction de la chlorophylle en utilisant l’acétone a 90% comme solvant avec trempage
durant la nuit après dilacération manuelle du filtre.
Centrifugation : élimination des particules restantes du filtre.
a- La méthode spectrophotométrique :
Estimation des blancs :
Les blancs de cuve (bc λ) sont les mesures d’absorbance obtenues à chacune des longueurs
d’onde de la méthode (665 et 750 nm) en mettant le solvant d’extraction dans les cuves
utilisées .les blancs de cuve sont mesurés une fois avec chaque série d’analyses. Vérifier que
les blancs de cuve sont inchangés lorsque l’acétone est acidifiée. si ce n’est pas le cas, en tenir
compte dans les calculs. (AMINOT, et al., 2004).
b- Mesure des absorbances :
Si les extraits sont froids, les laisser revenir à température ambiante (à l’abri de la lumière)
avant les mesures afin d’éviter la condensation sur les faces optiques.
 Rincer plusieurs fois la cuve avec un peu de l’extrait à analyser
 Transférer dans la cuve assez de volume pour faire la mesure (la totalité du faisceau
optique doit traverser l’extrait).
 veiller à ne pas entrainer de fibres
 Vérifier la propreté des faces de la cuve et la positionner correctement sur le portoir.
 Mesurer les absorbances brutes de l’extrait non acidifier aux longueurs d’ondes de
665et 750nm : Ana 665brut,Bna brut.
 Sortir la cuve et aouter directement dans la cuve) l’acide chlorhydrique a 0.3 mol/l a
raison de 10 à 20 µl par millilitre d’extrait.
 boucher, agiter et replacer précisément la cuve.
 Laisser agir l’acide entre 2 et 5 min.
 Mesurer à nouveau les absorbances brutes des extraits acidifiés à 665 et 750 nm :
Aa665brut et Babrut. (AMINOT, et al., 2004)