52
Figure II.30 : Les étapes de la technique AFLP (Arnaud, 2006).
Application AFLP
L'ADN est digéré par deux enzymes de restriction (étape 1) (fig.32) dont les sites de
reconnaissance (gris foncé) sont respectivement rare (e.g, EcoRI) et fréquent (e.g, MseI). Des
adaptateurs (gris clair) de séquence connue (en gras) et spécifiques de chacun des deux sites
de restriction sont ensuite fixés aux extrémités cohésives des fragments de digestion par
ligation (étape 2) (Ulrich G.Mueller L,LaReesa Wolfenbarger,1999).
L'utilisation d'un couple d'amorces (segments fléchés) complémentaires des adaptateurs et
munies d'une base sélective en 3' permet l'amplification d'une première sous-population de
fragments (étape 3) (Ulrich G.Mueller L,LaReesa Wolfenbarger,1999).
Le processus s'achève par une seconde étape d'amplification à l'aide d'amorces complétées en
3' par trois bases sélectives supplémentaires (étape4) (Ulrich G.Mueller L,LaReesa
Wolfenbarger,1999).
La séparation des produits d'amplification en gel d'agarose ou le plus souvent en gel
d'acrylamide génère enfin un profil multilocus, qui est spécifique pour chaque espèce (Ulrich
G.Mueller L,LaReesa Wolfenbarger,1999).