Chapitre II
Matériel et Méthodes
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o Principe de la méthode (dosage de la chlorophylle a par spectrophotométrie)
La méthode consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le filtre sera ensuite
immergé dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments, puis, on mesure l’absorbance
avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied, 1983).
o Mode opératoire
 Les échantillons d’eau (environ 5OO ml) sont filtrés sur des disques filtrants en fibre de
verre (Wattman GF/C, diamètre 47 µm).
 Chaque filtre est ensuite plié, mis dans du papier aluminium (portant le numéro de
l’échantillon et la date de prélèvement) et immédiatement congelé à –20° C.
 L’extrait et le dosage de la chlorophylle a est réalisé selon la méthode de Lorenzen (1967)
in (Aminot et Chaussepied, 1983).
 L’extraction des pigments s’effectue dans des tubes en verre contenant 10 ml d’acétone à
90%.
 Ces tubes sont recouverts par du papier aluminium et sont immédiatement placés au
réfrigérateur (environ 4° C) pendant 24 heures.
 L’absorbance de l’extrait pigmentaire dans le solvant est ensuite estimée avant (A
na
) et
après acidification (A
a
) avec 50 μl d’acide chlorhydrique (HCl à 0,5 N).
 Les lectures d’absorbances sont effectuées sur un spectrophotomètre aux longueurs
d’ondes 665 mm et 750 mm avant et après acidification.
 Le calcul des concentrations de la chlorophylle a se fait à partir de l’équation de Lorenzen
(1967) in (Aminot et Chaussepied, 1983) :
26,7 (A
na 665 - A
a
665 ). v
[Chlorophylle a] (mg/m
3
) =
V.l
V : volume d’eau filtrée (l).
v : volume de solvant d’extraction (ml).
I : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm).
A
na 665 : absorbance nette corrigée (avant acidification).
A
a 665 : absorbance nette corrigée (après acidification).