Annexe 10
9. Préparation des échantillons pour l’observation au Microscope
Electronique à Balayage (MEB) :
Les Cestodes et Acanthocéphales vivants sont placés dans des boites de Petri contenant du
sérum physiologique puis mis au réfrigérateur (8h à 12h) pour favoriser leur relaxation et
surtout provoquer l’émergence du proboscis chez les acanthocéphales (Meddour et
Bouderda,1999 ; Meddour et Meddour,2002). Les échantillons sont fixés et conservés dans
l’éthanol à 70° ou du formaldéhyde à 10%.
Les parasites sont rincés dans l’eau distillée et leur surface externe nettoyée sous loupe
binoculaire à l’aide de pinceaux fins. Cette étape importante permet d’éliminer les tissus ou
débris organiques fixés sur la surface externe du parasite et favorise des observations propres
au MEB.
Les spécimens sont soumis à une déshydratation dans une série de bains
successifs d’éthanol (30°, 50°, 70°, 80°, 90°, et deux fois dans 100°) durant
24 heures pour chacune de ces étapes.
La déshydratation totale au point critique des échantillons est réalisée dans un appareil
Pollaron T-3000 à une pression CO2 de 800 Lbs/inch² à 31,2°C.
Les échantillons sont blanchâtres et d’une extrême fragilité.
Les échantillons sont métallisés sous vide (Coating Process), par
pulvérisation cathodique, à sec, à base d’une texture Or (60%) et Palladium
(40%) dans un appareil de type Pollaron E-5100.
Les parasites sont observés au MEB de type Philips 501-B à 7.2 k.V. sauf avis contraire.
10. Nomenclature des indices parasitaires :
Afin de mieux cerner la dynamique des parasitoses, nous avons utilisé la nomenclature de
Margolis et al. (1982) pour le calcul des indices parasitaires :
Prévalence Spécifique (P) ou Taux d’infestation :
C’est le pourcentage du rapport du nombre d’hôtes infestés (N) par une espèce parasitaire sur le
nombre total de poissons examinés (H).
P (%) = (N / H) x 100
Avec : P = Prévalence
N = Nombre d’hôtes infestés par l’espèce parasite.
H = Nombre de poissons examinés
Intensité Parasitaire Moyenne (I) :
C’est le rapport du nombre (n) d’individus d’une espèce de parasite récoltés dans un échantillon
d’hôtes sur le nombre d’hôtes infestés (N) par ce parasite ; soit le nombre moyen de parasites par
hôte infesté dans l’échantillon.
I = n / N
Abondance Parasitaire (A) :
C’est le rapport du nombre total (n) d’individus d’une espèce parasitaire dans un échantillon
d’hôtes sur le nombre total de poissons hôtes examinés (H).
A = n / H
9. Préparation des échantillons pour l’observation au Microscope
Electronique à Balayage (MEB) :
Les Cestodes et Acanthocéphales vivants sont placés dans des boites de Petri contenant du
sérum physiologique puis mis au réfrigérateur (8h à 12h) pour favoriser leur relaxation et
surtout provoquer l’émergence du proboscis chez les acanthocéphales (Meddour et
Bouderda,1999 ; Meddour et Meddour,2002). Les échantillons sont fixés et conservés dans
l’éthanol à 70° ou du formaldéhyde à 10%.
Les parasites sont rincés dans l’eau distillée et leur surface externe nettoyée sous loupe
binoculaire à l’aide de pinceaux fins. Cette étape importante permet d’éliminer les tissus ou
débris organiques fixés sur la surface externe du parasite et favorise des observations propres
au MEB.
Les spécimens sont soumis à une déshydratation dans une série de bains
successifs d’éthanol (30°, 50°, 70°, 80°, 90°, et deux fois dans 100°) durant
24 heures pour chacune de ces étapes.
La déshydratation totale au point critique des échantillons est réalisée dans un appareil
Pollaron T-3000 à une pression CO2 de 800 Lbs/inch² à 31,2°C.
Les échantillons sont blanchâtres et d’une extrême fragilité.
Les échantillons sont métallisés sous vide (Coating Process), par
pulvérisation cathodique, à sec, à base d’une texture Or (60%) et Palladium
(40%) dans un appareil de type Pollaron E-5100.
Les parasites sont observés au MEB de type Philips 501-B à 7.2 k.V. sauf avis contraire.
10. Nomenclature des indices parasitaires :
Afin de mieux cerner la dynamique des parasitoses, nous avons utilisé la nomenclature de
Margolis et al. (1982) pour le calcul des indices parasitaires :
Prévalence Spécifique (P) ou Taux d’infestation :
C’est le pourcentage du rapport du nombre d’hôtes infestés (N) par une espèce parasitaire sur le
nombre total de poissons examinés (H).
P (%) = (N / H) x 100
Avec : P = Prévalence
N = Nombre d’hôtes infestés par l’espèce parasite.
H = Nombre de poissons examinés
Intensité Parasitaire Moyenne (I) :
C’est le rapport du nombre (n) d’individus d’une espèce de parasite récoltés dans un échantillon
d’hôtes sur le nombre d’hôtes infestés (N) par ce parasite ; soit le nombre moyen de parasites par
hôte infesté dans l’échantillon.
I = n / N
Abondance Parasitaire (A) :
C’est le rapport du nombre total (n) d’individus d’une espèce parasitaire dans un échantillon
d’hôtes sur le nombre total de poissons hôtes examinés (H).
A = n / H