Matériel et méthodes
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5.2. Méthode de détermination de l’activité antibactérienne
Dans le but de déterminer d’une manière générale l’activité antibactérienne de l’huile du
chinchard, nous avons utilisé la méthode de diffusion en milieu gélosé (antibiogramme).
Pour cela, nous avons préparé des suspensions bactériennes à partir des germes isolés et
purifiés auparavant, où on prélève 2 à 3 colonies jaunes sur Chapman (S. aureus) et on les met
dans 5 ml d’eau physiologiques, or les deux autres germes dans de l’eau distillée stérile.
➢ Mode opératoire :
La méthode de diffusion ou des disques en milieu solide est la plus simple, cette dernière
consiste à :
- Tremper un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de la souche a
testée, après avoir bien agité le tube.
- Presser fermement contre les parois intérieures du tube juste au-dessus du niveau
du liquide, puis tourner l’écouvillon pour enlever les liquides excédentaires.
- Ensemencer à 4 reprises la surface entière de la gélose (Mueller Hinton), en
tournant la boite à environ 80° après chaque étalement pour obtenir une
meilleure distribution de la suspension. Enfin écouvillonner partout autour du
bord de la surface de la gélose.
- À l’aide d’une pince stérile un disque d’antibiogramme est imbibé dans l’huile
et un autre dans le solvant utilisé pour la préparation de la suspension (dans le
but de tester l’activité de notre solvant stérile ; eau distillée et/ou eau
physiologique)
- Déposer individuellement et doucement les disques contre la gélose.
- Laisser reposer les boites pendant 30 min pour permettre la diffusion de l’huile
sur la gélose.
- Incuber à 37ºC pendant 24 à 48h.
➢ Lecture :
Après l’incubation l’effet antibactérien de l’huile peut se traduire par l’apparition autour
de disque d’une zone circulaire transparente correspondant à l’absence de la croissance
bactérienne. Plus le diamètre de cette zone est grand plus la souche est sensible. (CHOI &
al, 2006).
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5.2. Méthode de détermination de l’activité antibactérienne
Dans le but de déterminer d’une manière générale l’activité antibactérienne de l’huile du
chinchard, nous avons utilisé la méthode de diffusion en milieu gélosé (antibiogramme).
Pour cela, nous avons préparé des suspensions bactériennes à partir des germes isolés et
purifiés auparavant, où on prélève 2 à 3 colonies jaunes sur Chapman (S. aureus) et on les met
dans 5 ml d’eau physiologiques, or les deux autres germes dans de l’eau distillée stérile.
➢ Mode opératoire :
La méthode de diffusion ou des disques en milieu solide est la plus simple, cette dernière
consiste à :
- Tremper un écouvillon stérile dans la suspension bactérienne de la souche a
testée, après avoir bien agité le tube.
- Presser fermement contre les parois intérieures du tube juste au-dessus du niveau
du liquide, puis tourner l’écouvillon pour enlever les liquides excédentaires.
- Ensemencer à 4 reprises la surface entière de la gélose (Mueller Hinton), en
tournant la boite à environ 80° après chaque étalement pour obtenir une
meilleure distribution de la suspension. Enfin écouvillonner partout autour du
bord de la surface de la gélose.
- À l’aide d’une pince stérile un disque d’antibiogramme est imbibé dans l’huile
et un autre dans le solvant utilisé pour la préparation de la suspension (dans le
but de tester l’activité de notre solvant stérile ; eau distillée et/ou eau
physiologique)
- Déposer individuellement et doucement les disques contre la gélose.
- Laisser reposer les boites pendant 30 min pour permettre la diffusion de l’huile
sur la gélose.
- Incuber à 37ºC pendant 24 à 48h.
➢ Lecture :
Après l’incubation l’effet antibactérien de l’huile peut se traduire par l’apparition autour
de disque d’une zone circulaire transparente correspondant à l’absence de la croissance
bactérienne. Plus le diamètre de cette zone est grand plus la souche est sensible. (CHOI &
al, 2006).