Chapitre 2 : Matériel et méthode
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II.4.3 Etude quantitative du phytoplancton
L’analyse du phytoplancton dans ce cadre se fait conformément aux recommandations de la
norme guide pour le dénombrement du phytoplancton par microscopie inversée - norme (NF
EN 15204, 2006), correspondant à la méthode d’Utermöhl (1958) adoptée au niveau européen.
Quelques précisions sont cependant nécessaires pour homogénéiser l’acquisition des données.
II.4.4 Principe de la méthode de sédimentation d’Utermöhl (1958) pour le comptage
des cellules
La méthode d’Utermöhl a été définie en 1931 par Utermöhl, et qui est devenue la méthode
quantitative standard pour compter le phytoplancton dans le monde entier (Lund et al., 1958 ;
Andersen et Kristensen, 1995). Cette méthode utilise une chambre dans laquelle on place un
sous-échantillon de 5 à 50 ml et on le laisse se déposer sur une cuve, pour un dénombrement
du phytoplancton à l'aide d'un microscope inversé.
Cette méthode devient de plus en plus utile lorsque l'abondance du phytoplancton diminue. En
effet, la majeure partie des cellules phytoplanctonique se dépose avec cette méthode (Lund et
al., 1958).
II.5 Application du mode opératoire
II.5.1 Nettoyage du matériel
Dans le cadre de notre travail, une chambre de sédimentation de 25 ml a été nettoyée par le
détergent à l’aide d’un écouvillon, puis elle est rincée à l’eau distillée.
II.5.2 Atteinte de l’équilibre thermique
Pour que le plancton soit réparti aléatoirement dans la chambre de sédimentation, l'échantillon
et tout l'équipement utilisé doivent être à des températures similaires. Pour cette raison, les
échantillons et les matériaux traités sont stockés dans une salle où le comptage aura lieu.
II.5.3 Homogénéisation de l’échantillon
Afin de remettre en suspension l’échantillon après un stockage de plus ou moins courte durée,
il est quand même, nécessaire d’agiter le flacon contenant l’échantillon à traité (figure 26).
L’agitation est faite manuellement pendant une 15
aine
de secondes, et comprends une 15
aine
de
mouvements verticaux et horizontaux. Cette agitation ne doit pas être trop vigoureuse de façon
à ne pas entraîner la désintégration des colonies fragiles.
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II.4.3 Etude quantitative du phytoplancton
L’analyse du phytoplancton dans ce cadre se fait conformément aux recommandations de la
norme guide pour le dénombrement du phytoplancton par microscopie inversée - norme (NF
EN 15204, 2006), correspondant à la méthode d’Utermöhl (1958) adoptée au niveau européen.
Quelques précisions sont cependant nécessaires pour homogénéiser l’acquisition des données.
II.4.4 Principe de la méthode de sédimentation d’Utermöhl (1958) pour le comptage
des cellules
La méthode d’Utermöhl a été définie en 1931 par Utermöhl, et qui est devenue la méthode
quantitative standard pour compter le phytoplancton dans le monde entier (Lund et al., 1958 ;
Andersen et Kristensen, 1995). Cette méthode utilise une chambre dans laquelle on place un
sous-échantillon de 5 à 50 ml et on le laisse se déposer sur une cuve, pour un dénombrement
du phytoplancton à l'aide d'un microscope inversé.
Cette méthode devient de plus en plus utile lorsque l'abondance du phytoplancton diminue. En
effet, la majeure partie des cellules phytoplanctonique se dépose avec cette méthode (Lund et
al., 1958).
II.5 Application du mode opératoire
II.5.1 Nettoyage du matériel
Dans le cadre de notre travail, une chambre de sédimentation de 25 ml a été nettoyée par le
détergent à l’aide d’un écouvillon, puis elle est rincée à l’eau distillée.
II.5.2 Atteinte de l’équilibre thermique
Pour que le plancton soit réparti aléatoirement dans la chambre de sédimentation, l'échantillon
et tout l'équipement utilisé doivent être à des températures similaires. Pour cette raison, les
échantillons et les matériaux traités sont stockés dans une salle où le comptage aura lieu.
II.5.3 Homogénéisation de l’échantillon
Afin de remettre en suspension l’échantillon après un stockage de plus ou moins courte durée,
il est quand même, nécessaire d’agiter le flacon contenant l’échantillon à traité (figure 26).
L’agitation est faite manuellement pendant une 15
aine
de secondes, et comprends une 15
aine
de
mouvements verticaux et horizontaux. Cette agitation ne doit pas être trop vigoureuse de façon
à ne pas entraîner la désintégration des colonies fragiles.