Chapitre II: matériel et méthodes
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5. Techniques de caractérisation et d’identification de quelques
bactéries
5.1. Coloration de Gram
Cette coloration des cellules bactériennes permet à la fois de connaître la morphologie
des bactéries et de les classer en deux groupes en fonction de leur capacité ou non à
retenir la coloration violette du cristal violet dans les conditions opératoires. Cette
division découle principalement de différences dans la structure des parois cellulaires
des deux groupes. (Jean et Monique,1997).
Protocole de la coloration de Gram
 On prépare un frottis sec et fixer d’une culture bactérienne pure.
 On recouvrit le frottis de violet de Gentiane ; laisser agir une minute ; rincer à
l’eau du robinet.
 On verse du Lugol et le laisser agir pendant une minute ; rincer à l’eau de robinet.
 On décolore à l’alcool à 95%, 15 secondes ; rincer à l’eau de robinet.
 On recolore avec la Fushine pendant une minute ; rincer à l’eau de robinet.
 On sèche au –dessus de la flamme d’un bec benzène.
Les cellules Gram négatif apparaissent roses et les cellules Gram positif apparaissent
sous une couleur violette (Singleton et Sainsbury, 1984)
5.2. Test de la catalase
La catalase est une enzyme présente chez les bactéries aérobies strictes. Elle permet
de détruire des peroxydes formés au cours de réaction de l’oxydation (Dellarras et
Bernard, 2003) .
Technique
Prélever une colonie et déposer sur une lame propre. Ajouter une goutte de H2O2 sur
les bactéries.