CHAPITRE II : MATÉRIELS ET MÉTHODES
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12.4.3. Techniques de caractérisation et d’identification de quelques bactéries :
a) Coloration de Gram :
Cette coloration des cellules bactériennes permet à la fois de connaitre la morphologie
des bactéries et de les classer en 02 groupes en fonction de leur capacité à retenir la coloration
violette du cristal violet dans les conditions opératoires. Cette division découle principalement
des différences dans la structure des parois cellulaires des deux groupes (BERGEY, 1994).
 Mode opératoire :
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Préparez un frottis d’une culture bactérienne pure séchée et fixée.
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Recouvrez le frottis de violet de Gentiane, laissez-le agir 1min puis rincez avec l’eau.
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Versez du Lugol et laissez-le agir pendant une minute puis rincez-le avec l’eau.
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Décolorer à l’alcool à 95%, 15 secondes puis rincer à l’eau.
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Contre-coloration avec la Fuchsine pendant 1min puis rincer à l’eau.
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Séchage entre deux papiers joseph.
Les cellules Gram négatif apparaissent roses et les cellules Gram positif apparaissent sous
une couleur violette (SINGLETON & SAINSBURY, 1984).
Figure.19. Observation microscopique des bactéries à Gram négatif et Gram positif.
b) Test de catalase :
La catalase est une enzyme présente chez la plupart des bactéries aérobies strictes et
certaines anaérobies facultatives. Elle permet de détruire des peroxydes formés au cours d’une
réaction d’oxydation (DELLARRAS & BERNARD, 2003).
 Technique :
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Prélever une colonie et déposer sur une lame propre.
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Ajouter une goutte de H2O2 sur les bactéries.
Gram -
Gram +