Matériel et méthodes
46
Test confirmatif :
 Pour la confirmation on prend la même membrane et on la dépose sur le milieu BEA
 Incuber les boîtes à une température de 37°C pendant 2 heures.
 Si les colonies deviennent noires : on est en présence d’entérocoques.
 Compter le nombre de colonies noires formées sur la membrane.
Figure 32 : Dépôt de la membrane sur le milieu BEA
 Recherche des entérocoques dans le sédiment par la méthode du nombre le plus
probable (N.P.P)
Pour la recherche des entérocoques dans les sédiments, nous avons utilisé la méthode du
nombre le plus probable (NPP).
La méthode du NPP repose sur la dilution sériée des échantillons de sédiments dans des milieux
de culture spécifiques, permettant l’estimation du nombre le plus probable de bactéries en
fonction de la présence ou de l’absence de croissance bactérienne. Cette approche fournit ainsi
des données quantitatives précieuses sur la contamination bactérienne des sédiments marins.
Elle s’effectue en deux étapes :
1-Test présomptif
Les dilutions sérielles réalisées permettent de créer une gamme de concentrations différentes
de bactéries présentes dans les échantillons.
Mode opératoire
Préparation de la série de dilutions : Diluer 1 g de sédiment dans un tube contenant 9 ml d'eau
distillée stérile pour obtenir la première dilution.
Continuer la dilution en inoculant 1 ml de la première dilution dans 9 ml d'eau distillée stérile
pour obtenir une dilution de 10
-2 . Répéter ce processus jusqu'à obtenir une dilution de 10
-3 .