CHAPITRE II
Matériel & Méthodes
II.5.1.3 Identification des cocci à Gram positif
Les cocci à Gram positif peuvent appartenir au genre Staphylococcus (catalase- positif), qui se présente sous forme de grappes, ou Streptococcus (catalase-négatif), qui se présente en chaînes (Sizar,
Unakal, 2022).
• Isolement sur milieu Chapman
Les cocci à Gram positif, suspectés d’être des staphylocoques en raison de leur regroupement en amas, ont été réisolés sur une gélose Chapman, un milieu sélectif, et incubés à 37°C
pendant 24 heures. L’identification a été confirmée par un test de catalase.
Pour confirmer la pathogénicité de Staphylococcus aureus un test de coagulase a été effectué.
• Test de coagulase
Ce test consiste en la mise en évidence de la coagulase qui est une protéine semblable à une
enzyme qui provoque la coagulation du plasma en convertissant le fibrinogène en fibrine.
À l’aide d’un fil stérile, prélever une partie de chaque colonie sélectionnée et l’ensemencer
dans un tube ou dans un flacon de bouillon cœur-cervelle Incuber à 35° C ou 37°C pendant
24 h ± 2 h. Ajouter aseptiquement 0,1 ml de chaque culture à 0,3 ml de plasma de lapin dans
des tubes stériles à hémolyse ou flacons incuber à 35°C± 2°C. En inclinant le tube, examiner
la coagulation du plasma après 4 h à 6 h d’incubation et, si le test est négatif, réexaminer
après 24 h d’incubation (JORADP, 2014). Fig.II.7
30
Matériel & Méthodes
II.5.1.3 Identification des cocci à Gram positif
Les cocci à Gram positif peuvent appartenir au genre Staphylococcus (catalase- positif), qui se présente sous forme de grappes, ou Streptococcus (catalase-négatif), qui se présente en chaînes (Sizar,
Unakal, 2022).
• Isolement sur milieu Chapman
Les cocci à Gram positif, suspectés d’être des staphylocoques en raison de leur regroupement en amas, ont été réisolés sur une gélose Chapman, un milieu sélectif, et incubés à 37°C
pendant 24 heures. L’identification a été confirmée par un test de catalase.
Pour confirmer la pathogénicité de Staphylococcus aureus un test de coagulase a été effectué.
• Test de coagulase
Ce test consiste en la mise en évidence de la coagulase qui est une protéine semblable à une
enzyme qui provoque la coagulation du plasma en convertissant le fibrinogène en fibrine.
À l’aide d’un fil stérile, prélever une partie de chaque colonie sélectionnée et l’ensemencer
dans un tube ou dans un flacon de bouillon cœur-cervelle Incuber à 35° C ou 37°C pendant
24 h ± 2 h. Ajouter aseptiquement 0,1 ml de chaque culture à 0,3 ml de plasma de lapin dans
des tubes stériles à hémolyse ou flacons incuber à 35°C± 2°C. En inclinant le tube, examiner
la coagulation du plasma après 4 h à 6 h d’incubation et, si le test est négatif, réexaminer
après 24 h d’incubation (JORADP, 2014). Fig.II.7
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