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Chapitre II
Matériel et méthodes
II.1.2.3.5.
Dosage d’azote totale/phosphore totale
Principe
En milieu acide dilué, le fer réduit transforme l'azote nitrique et nitreux de l'échantillon en azote
ammoniacal. L'ensemble est minéralisé en milieu sulfurique concentré et l'azote organique est
ainsi transformé en sulfate d'ammonium. Le liquide sulfurique est dilué, puissoumis à une
distillation en milieu fortement alcalin, ce qui permet, en titrant l'ammoniac libéré, de connaître
la teneur en azote total (laine G., 1980).
La méthode de dosage du phosphore total repose sur l’oxydation de la matière organique et la
conversion de l’une des catégories de phosphate en orthophosphate soluble, par l’action d’un
acide et d’un agent oxydant. En milieu acide, le molybdate d’ammonium et le tartrate
d’antimoine et de potassium réagissent avec l’orthophosphate pour former l’acide
phosphomolybdique. Ce dernier est ensuite réduit par l’acide ascorbique pour former un
complexe bleu intense, de type colloïdal. L’intensité de la couleur est proportionnelle à la
concentration d’orthophosphates et est mesurée par spectrophotométrie à 880 nm
(https://ville.montreal.qc.ca/pls/portal/docs/PAGE/ENVIRO_FR/MEDIA/DOCUMENTS/9V
DM_M-CR-5.4-051_PHOSPHORE.PDF).
Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d'une solution mère puis une solution fille pour chaque
élément à analyser (voir annexe 1). Les droites d'étalonnage sont établies automatiquement par
le logiciel en utilisant les concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic
correspondantes (voir annexes 2).
II.1.3. Protocole d’isolement des microalgues
II.1.3.1. Milieux de culture
Nous avons utilisé un milieu commun pour l’isolement et la culture des espèces de microalgues
de l’eau douce largement rapporté dans la littérature, qui est appelé BG11.Ce milieu a été
préparé pour isoler et cultiver les microalgues issues des échantillons de la STEP Chenoua. Le
même milieu additionné de NaCl à 1% (m/v) a été utilisé pour l’isolement des microalgues
enrichies à partir du bassin de la ferme marine du CNRDPA. La préparation des deux milieux
BG11 et BG11-NaCl a été menée selon le protocole décrit par https://utex.org/products/bg-11medium.
Chapitre II
Matériel et méthodes
II.1.2.3.5.
Dosage d’azote totale/phosphore totale
Principe
En milieu acide dilué, le fer réduit transforme l'azote nitrique et nitreux de l'échantillon en azote
ammoniacal. L'ensemble est minéralisé en milieu sulfurique concentré et l'azote organique est
ainsi transformé en sulfate d'ammonium. Le liquide sulfurique est dilué, puissoumis à une
distillation en milieu fortement alcalin, ce qui permet, en titrant l'ammoniac libéré, de connaître
la teneur en azote total (laine G., 1980).
La méthode de dosage du phosphore total repose sur l’oxydation de la matière organique et la
conversion de l’une des catégories de phosphate en orthophosphate soluble, par l’action d’un
acide et d’un agent oxydant. En milieu acide, le molybdate d’ammonium et le tartrate
d’antimoine et de potassium réagissent avec l’orthophosphate pour former l’acide
phosphomolybdique. Ce dernier est ensuite réduit par l’acide ascorbique pour former un
complexe bleu intense, de type colloïdal. L’intensité de la couleur est proportionnelle à la
concentration d’orthophosphates et est mesurée par spectrophotométrie à 880 nm
(https://ville.montreal.qc.ca/pls/portal/docs/PAGE/ENVIRO_FR/MEDIA/DOCUMENTS/9V
DM_M-CR-5.4-051_PHOSPHORE.PDF).
Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d'une solution mère puis une solution fille pour chaque
élément à analyser (voir annexe 1). Les droites d'étalonnage sont établies automatiquement par
le logiciel en utilisant les concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic
correspondantes (voir annexes 2).
II.1.3. Protocole d’isolement des microalgues
II.1.3.1. Milieux de culture
Nous avons utilisé un milieu commun pour l’isolement et la culture des espèces de microalgues
de l’eau douce largement rapporté dans la littérature, qui est appelé BG11.Ce milieu a été
préparé pour isoler et cultiver les microalgues issues des échantillons de la STEP Chenoua. Le
même milieu additionné de NaCl à 1% (m/v) a été utilisé pour l’isolement des microalgues
enrichies à partir du bassin de la ferme marine du CNRDPA. La préparation des deux milieux
BG11 et BG11-NaCl a été menée selon le protocole décrit par https://utex.org/products/bg-11medium.