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Chapitre II
Matériel et méthodes
Analyse automatique des sels nutritifs dans d’eau
L'analyse automatique consiste à réaliser automatiquement les différentes manipulations
nécessaires à un dosage manuel : prélèvements, analyse et lecture (Rodier et al, 1996).
Dans notre étude, le dosage des sels nutritifs s'est fait par colorimétrie à flux continu sur chaîne
automatisée « Auto-Analyzer SAN PLUS » selon les protocoles définis par le fabricant (Skalar,
1998) (voir annexes 1).
Le fonctionnement de l'appareil repose sur un principe dynamique simple, celui de l'analyse
liquide en flux continu :
Une veine liquide progresse, par l'intermédiaire d'une pompe péristaltique, en continu, ce qui
autorise une polyvalence et une grande souplesse. Les réactions chimiques s'effectuent dans
cette veine en progression. L'analyse des échantillons est réalisée par séquence, ce qui permet
une grande cadence de travail.
II.1.2.3.1. Dosage de l’ammonium
Principe
Le dosage de l'ammonium (NH4) est réalisé suivant la méthode de Koroleff, 1969 (Aminot et
Chaussepied, 1983).
En milieu alcalin (8< pH < 11,5), l'ammonium dissous réagit sur l'hypochlorite pour former une
monochloramine.
Ce composé, en présence de phénol et d'un excès d'hypochlorite (milieu oxydant) donne lieu à
la formation d'un bleu d'indophénol. La réaction est catalysée par le nitroprussiate de sodium.
Le maximum d'absorption se fait à une longueur d'onde de 630 nm.
II.1.2.3.2. Dosage Des nitrites et des nitrates
Principe
Les nitrites (NO2) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide pH 2.
Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylenediamine un composé azoïque de
couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider et Robinson, 1952 et Skalar, 1998).
La méthode de dosage de nitrate est basée sur la réduction des nitrates (NO3) en nitrites (NO2)
par passage de l'échantillon sur une colonne de cadmium traité au cuivre (Wood et al, 1967).
Les nitrites seront ensuite dosés par colorimétrie selon la méthode précédemment décrite. Il
suffira alors d'en déduire la concentration des nitrites déterminés directement (sans passage de
Chapitre II
Matériel et méthodes
Analyse automatique des sels nutritifs dans d’eau
L'analyse automatique consiste à réaliser automatiquement les différentes manipulations
nécessaires à un dosage manuel : prélèvements, analyse et lecture (Rodier et al, 1996).
Dans notre étude, le dosage des sels nutritifs s'est fait par colorimétrie à flux continu sur chaîne
automatisée « Auto-Analyzer SAN PLUS » selon les protocoles définis par le fabricant (Skalar,
1998) (voir annexes 1).
Le fonctionnement de l'appareil repose sur un principe dynamique simple, celui de l'analyse
liquide en flux continu :
Une veine liquide progresse, par l'intermédiaire d'une pompe péristaltique, en continu, ce qui
autorise une polyvalence et une grande souplesse. Les réactions chimiques s'effectuent dans
cette veine en progression. L'analyse des échantillons est réalisée par séquence, ce qui permet
une grande cadence de travail.
II.1.2.3.1. Dosage de l’ammonium
Principe
Le dosage de l'ammonium (NH4) est réalisé suivant la méthode de Koroleff, 1969 (Aminot et
Chaussepied, 1983).
En milieu alcalin (8< pH < 11,5), l'ammonium dissous réagit sur l'hypochlorite pour former une
monochloramine.
Ce composé, en présence de phénol et d'un excès d'hypochlorite (milieu oxydant) donne lieu à
la formation d'un bleu d'indophénol. La réaction est catalysée par le nitroprussiate de sodium.
Le maximum d'absorption se fait à une longueur d'onde de 630 nm.
II.1.2.3.2. Dosage Des nitrites et des nitrates
Principe
Les nitrites (NO2) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide pH 2.
Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylenediamine un composé azoïque de
couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider et Robinson, 1952 et Skalar, 1998).
La méthode de dosage de nitrate est basée sur la réduction des nitrates (NO3) en nitrites (NO2)
par passage de l'échantillon sur une colonne de cadmium traité au cuivre (Wood et al, 1967).
Les nitrites seront ensuite dosés par colorimétrie selon la méthode précédemment décrite. Il
suffira alors d'en déduire la concentration des nitrites déterminés directement (sans passage de