Annexe I : protocole d’extraction
a) Dosage des toxines diarrhéique (DSP)
L'extraction s'effectue sur 20 g (pesés précisément, au dg puis au cg près) de glandes
digestives.
Extraire avec une solution de méthanol/eau 80/20, 2 fois 60 ml :
Ajouter aux 20 g de glandes digestives 60 ml d'une solution de méthanol/eau 80120. Mélanger
jusqu'à obtention d'une solution homogène. Filtrer sur papier Watman Je mélange obtenu ou
centrifuger à 2000 tours 1 min. pendant 5 minutes.
Reprendre le résidu avec 60 ml de la solution méthanol / eau. Homogénéiser à l’ultraturax
durant une à deux minutes. Filtrer sur papier le mélange obtenu ou centrifuger à 2000 tours/
min. pendant 5 minutes. On recueille environ 120 ml de solution (filtrat).
Le résidu est éliminé. Continuer l'extraction sur le filtrat (surnageant).
Faire une extraction liquide/liquide avec de l'hexane, 2 fois 60 ml :
Mettre le filtrat dans une ampoule à décanter. Ajouter 60 ml d'hexane. Retourner l'ampoule et
agiter délicatement en ouvrant de temps en temps le robinet pour dégazer. Si l'agitation est trop
brutale, il peut se former des émulsions conduisant à une décantation difficile. Laisser décanter
jusqu'à obtention de deux phases nettes (environ 5 à 10 minutes). La phase hexane se trouve
au-dessus de la phase méthanol/eau. Récupérer la phase méthanol dans une autre ampoule et
éliminer la phase hexane.
Ajouter à nouveau 60 ml d'hexane et refaire la même opération.
Ajouter à la phase aqueuse (environ 120 ml de méthanol/eau) 20 ml d'eau
Faire une extraction liquide/liquide avec du dichlorométhane, 2 fois 80 ml :
Ajouter 80 ml de dichlorométhane. Retourner l'ampoule et agiter délicatement en ouvrant de
temps en temps le robinet pour dégazer. Si l'agitation est trop brutale, il peut se former des
émulsions conduisant à une décantation difficile. Laisser décanter jusqu'à obtention de deux
phases nettes (environ 5 à 10 minutes). La phase dichlorométhane se trouve au-dessous de la
phase aqueuse (méthanol/eau). Récupérer la phase dichlorométhane dans une autre ampoule et
garder la phase aqueuse dans un bécher.
a) Dosage des toxines diarrhéique (DSP)
L'extraction s'effectue sur 20 g (pesés précisément, au dg puis au cg près) de glandes
digestives.
Extraire avec une solution de méthanol/eau 80/20, 2 fois 60 ml :
Ajouter aux 20 g de glandes digestives 60 ml d'une solution de méthanol/eau 80120. Mélanger
jusqu'à obtention d'une solution homogène. Filtrer sur papier Watman Je mélange obtenu ou
centrifuger à 2000 tours 1 min. pendant 5 minutes.
Reprendre le résidu avec 60 ml de la solution méthanol / eau. Homogénéiser à l’ultraturax
durant une à deux minutes. Filtrer sur papier le mélange obtenu ou centrifuger à 2000 tours/
min. pendant 5 minutes. On recueille environ 120 ml de solution (filtrat).
Le résidu est éliminé. Continuer l'extraction sur le filtrat (surnageant).
Faire une extraction liquide/liquide avec de l'hexane, 2 fois 60 ml :
Mettre le filtrat dans une ampoule à décanter. Ajouter 60 ml d'hexane. Retourner l'ampoule et
agiter délicatement en ouvrant de temps en temps le robinet pour dégazer. Si l'agitation est trop
brutale, il peut se former des émulsions conduisant à une décantation difficile. Laisser décanter
jusqu'à obtention de deux phases nettes (environ 5 à 10 minutes). La phase hexane se trouve
au-dessus de la phase méthanol/eau. Récupérer la phase méthanol dans une autre ampoule et
éliminer la phase hexane.
Ajouter à nouveau 60 ml d'hexane et refaire la même opération.
Ajouter à la phase aqueuse (environ 120 ml de méthanol/eau) 20 ml d'eau
Faire une extraction liquide/liquide avec du dichlorométhane, 2 fois 80 ml :
Ajouter 80 ml de dichlorométhane. Retourner l'ampoule et agiter délicatement en ouvrant de
temps en temps le robinet pour dégazer. Si l'agitation est trop brutale, il peut se former des
émulsions conduisant à une décantation difficile. Laisser décanter jusqu'à obtention de deux
phases nettes (environ 5 à 10 minutes). La phase dichlorométhane se trouve au-dessous de la
phase aqueuse (méthanol/eau). Récupérer la phase dichlorométhane dans une autre ampoule et
garder la phase aqueuse dans un bécher.