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4. Dosage de la Chlorophylle-a par spectrophotométrie ultraviolet (S.F.U.V)
Les analyses de concentration des pigments photosynthétiques sont impétrantes pour les études de
la production primaire dans l’océan, ainsi que la chlorophylle-a est la plus abondante et joue un rôle
clé dans le processus de la photosynthèse. L’appareil réalise une mesure de l’intensité de la lumière
qu’il reçoit de la solution à étudier, une fois celle-ci passée à travers une cuvette dont la matière doit
être adaptée à la longueur d’onde.
4.1. Appareillage
• Centrifugeuse de marque SIGMA.
• Spectrophotomètre.
• Matériels courants de laboratoire.
4.2. Réactif
4.2.1. Solvant d’extraction : Acétone à 90 %
La préparation du réactif est décrite en Annexe 6.
4.3. Mode opératoire
4.3.1. Filtration
• Les échantillons de 750ml sont filtrés sur des filtres Whatman GF/F de 0.7μm de porosité en
utilisant une rampe de filtration relié à une pompe à vide.
• Arrêter le vide juste avant que le filtre ne vienne à sec, pour éviter l’éclatement des cellules.
• Plier le filtre avec des pinces à bouts plats (maitre la face chargée à l’intérieur), éviter tout
contact des pinces et des particules présentes sur le filtre.
• Les placés dans les tubes à centrifuger en verre avec couverture.
4.3.2. Extraction de la chlorophylle-a
• Ajouter 5ml d’acétone 90% à l’aide d’une pipette en verre dans les tubes à centrifuger.
• Broyer le filtre à l’aide d’une baguette en verre.
• Compléter le volume d’extraction à 10ml d’acétone.
• Placer les six tubes sur un portoir recouvert de papier aluminium, afin de protéger les
échantillons de tout choc lumineux.
• Centrifuger 5min à 4000tours/min.
• Prélever le surnageant et le transférer dans une cuve de mesure de spectrophotomètre à l’aide
d’une seringue.
4. Dosage de la Chlorophylle-a par spectrophotométrie ultraviolet (S.F.U.V)
Les analyses de concentration des pigments photosynthétiques sont impétrantes pour les études de
la production primaire dans l’océan, ainsi que la chlorophylle-a est la plus abondante et joue un rôle
clé dans le processus de la photosynthèse. L’appareil réalise une mesure de l’intensité de la lumière
qu’il reçoit de la solution à étudier, une fois celle-ci passée à travers une cuvette dont la matière doit
être adaptée à la longueur d’onde.
4.1. Appareillage
• Centrifugeuse de marque SIGMA.
• Spectrophotomètre.
• Matériels courants de laboratoire.
4.2. Réactif
4.2.1. Solvant d’extraction : Acétone à 90 %
La préparation du réactif est décrite en Annexe 6.
4.3. Mode opératoire
4.3.1. Filtration
• Les échantillons de 750ml sont filtrés sur des filtres Whatman GF/F de 0.7μm de porosité en
utilisant une rampe de filtration relié à une pompe à vide.
• Arrêter le vide juste avant que le filtre ne vienne à sec, pour éviter l’éclatement des cellules.
• Plier le filtre avec des pinces à bouts plats (maitre la face chargée à l’intérieur), éviter tout
contact des pinces et des particules présentes sur le filtre.
• Les placés dans les tubes à centrifuger en verre avec couverture.
4.3.2. Extraction de la chlorophylle-a
• Ajouter 5ml d’acétone 90% à l’aide d’une pipette en verre dans les tubes à centrifuger.
• Broyer le filtre à l’aide d’une baguette en verre.
• Compléter le volume d’extraction à 10ml d’acétone.
• Placer les six tubes sur un portoir recouvert de papier aluminium, afin de protéger les
échantillons de tout choc lumineux.
• Centrifuger 5min à 4000tours/min.
• Prélever le surnageant et le transférer dans une cuve de mesure de spectrophotomètre à l’aide
d’une seringue.