HYDROCARBURES-CPG-CLHP (ORGANISMES)
5,5. ANALYSE PAR CPG DE LA FRACTION AROMATIQUE
5,5.1. Analyse directe sans purification
Lorsque le niveau de pollution est élevé, la fraction aromatique totale
ARO obtenue après chromatographie liquide sur Silicagel (§5.3) peut être
analysée directement par CPG après addition d’un étalon interne secondaire le tétracosane. Les conditions d’analyse sont identiques à celles indiquées au paragraphe 5.4.1.
Les chromatogrammes obtenus présentent, pour les extraits pollués,
une enveloppe chromatographique sur laquelle se superposent des pics bien
individualisés comme le montre la figure XXXI. 6. Un dosage global de la
fraction aromatique peut être réalisé en même temps que le dosage de chaque
composé identifié.
5.5.2. Analyse après une purification par CLHP
Dès que le niveau de pollution est faible, il apparaît, du fait des opérations
de concentrations effectuées, des pics chromatographiques bien individualisés qui ne sont manifestement pas des composés aromatiques. Bien que
leur identification n’ait pas été recherchée, ces composés sont de toute évidence des composés biogéniques oléfiniques du type C25H48 et C3OH5O
(sans doute du squalène). En conséquence, il est indispensable d’éliminer
ces derniers avant l’analyse chromatographique par CPG par une purification supplémentaire par CLHP de la fraction ARO. Cette CLHP sur support
polaire à polarité de phase normale permet d’obtenir la fraction aromatique
stricte.
La fraction ARO est reprise par 50 pi d’hexane. La purification est réalisée sur la moitié de la fraction, l’autre moitié étant soumise à la quantification par CLHP. Les conditions de CLHP sont celles décrites ci-après au
paragraphe 5.6. Les éluats sont analysés par le détecteur UV-254nm. Sont
collectées les fractions éluées entre le naphtalène et le coronène, c'est-à-dire
entre les facteurs de capacité k' 0,2 et 4,5 ; le volume collecté est d’environ
20 ml. Après évaporation à sec sous azote, le résidu est repris par 0,1 ml de
l’hexane contenant le tétracosane à la concentration de 15mg.l '. Cette
fraction aromatique purifiée est soumise à la CPG.
La quantification est réalisée selon la méthode de l’étalon interne comme
indiqué pour les aliphatiques (§ 5.4). Deux étalons internes sont utilisés :
un primaire de pyrène perdeutérié et un secondaire de C24 (tétracosane).
La caractérisation des HPA soufrés, marqueurs de pollution du type DBT,
est effectuée avec le détecteur spécifique.
5.6. ANALYSE PAR CLHP ET DÉTECTEURS UV ET FLUORESCENCE
DE LA FRACTION AROMATIQUE
Les conditions opératoires sont les suivantes. La colonne analytique
(20 cm x 4,6 mm) est remplie de particules de Lichrosorb-NH2 5 pm (merck)
par voie humide selon le procédé classique. Le solvant est 1 heptane (qua ite
Chromasol, sds) conservé sur sodium et dégazé en permanence par bullage
d hélium. Le débit de la phase mobile est fixé à 0,7 ml.min
ce qui entraîne
une perte de charge de 90 bar. L’éluat chromatographique est analyse par
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5,5. ANALYSE PAR CPG DE LA FRACTION AROMATIQUE
5,5.1. Analyse directe sans purification
Lorsque le niveau de pollution est élevé, la fraction aromatique totale
ARO obtenue après chromatographie liquide sur Silicagel (§5.3) peut être
analysée directement par CPG après addition d’un étalon interne secondaire le tétracosane. Les conditions d’analyse sont identiques à celles indiquées au paragraphe 5.4.1.
Les chromatogrammes obtenus présentent, pour les extraits pollués,
une enveloppe chromatographique sur laquelle se superposent des pics bien
individualisés comme le montre la figure XXXI. 6. Un dosage global de la
fraction aromatique peut être réalisé en même temps que le dosage de chaque
composé identifié.
5.5.2. Analyse après une purification par CLHP
Dès que le niveau de pollution est faible, il apparaît, du fait des opérations
de concentrations effectuées, des pics chromatographiques bien individualisés qui ne sont manifestement pas des composés aromatiques. Bien que
leur identification n’ait pas été recherchée, ces composés sont de toute évidence des composés biogéniques oléfiniques du type C25H48 et C3OH5O
(sans doute du squalène). En conséquence, il est indispensable d’éliminer
ces derniers avant l’analyse chromatographique par CPG par une purification supplémentaire par CLHP de la fraction ARO. Cette CLHP sur support
polaire à polarité de phase normale permet d’obtenir la fraction aromatique
stricte.
La fraction ARO est reprise par 50 pi d’hexane. La purification est réalisée sur la moitié de la fraction, l’autre moitié étant soumise à la quantification par CLHP. Les conditions de CLHP sont celles décrites ci-après au
paragraphe 5.6. Les éluats sont analysés par le détecteur UV-254nm. Sont
collectées les fractions éluées entre le naphtalène et le coronène, c'est-à-dire
entre les facteurs de capacité k' 0,2 et 4,5 ; le volume collecté est d’environ
20 ml. Après évaporation à sec sous azote, le résidu est repris par 0,1 ml de
l’hexane contenant le tétracosane à la concentration de 15mg.l '. Cette
fraction aromatique purifiée est soumise à la CPG.
La quantification est réalisée selon la méthode de l’étalon interne comme
indiqué pour les aliphatiques (§ 5.4). Deux étalons internes sont utilisés :
un primaire de pyrène perdeutérié et un secondaire de C24 (tétracosane).
La caractérisation des HPA soufrés, marqueurs de pollution du type DBT,
est effectuée avec le détecteur spécifique.
5.6. ANALYSE PAR CLHP ET DÉTECTEURS UV ET FLUORESCENCE
DE LA FRACTION AROMATIQUE
Les conditions opératoires sont les suivantes. La colonne analytique
(20 cm x 4,6 mm) est remplie de particules de Lichrosorb-NH2 5 pm (merck)
par voie humide selon le procédé classique. Le solvant est 1 heptane (qua ite
Chromasol, sds) conservé sur sodium et dégazé en permanence par bullage
d hélium. Le débit de la phase mobile est fixé à 0,7 ml.min
ce qui entraîne
une perte de charge de 90 bar. L’éluat chromatographique est analyse par
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