Préparation et stérilisation du matériel et des milieux de culture
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Stérilisation à l’autoclave à 121 ± 1 °C pendant 15 minutes.
Ce milieu est disponible en milieu déshydraté.
Préparer ce milieu en tubes ou en boîtes de Pétri, puis l’ensemencer par les
méthodes conventionnelles en fonction des besoins.
Incuber à 37 °C (en général) pendant 24 à 48 heures.
D’après le contrôle qualité de ce milieu, Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Streptococeus bovis CIP 5623, Enterococcus faecalis var. zymogenes ATCC 29212, Bacillus cereus ATCC 9634 et Listeria monocytogenes présentent une bonne
croissance, après 24 heures à 37 °C.
► Gélose trypease soja, bioMérieux"5 SA
Ce milieu est destiné à permettre la croissance de micro-organismes qui ne
présentent pas d’exigences particulières ; grâce à son mélange de peptones, il
assure la croissance de la plupart des micro-organismes. Il correspond au milieu
gélosé B de la Pharmacopée européenne 4 (2004) pour le contrôle des produits
non stériles (recherche de micro-organismes spécifiés) et il est conforme à l'USP
XXVI (2003) pour des tests microbiologiques (cf. annexe générale 7 « Milieux
de culture utilisés en Pharmacopée »).
La formule théorique de ce milieu de culture en g/L d’eau purifiée est :
Peptone de caséine (bovin) ................................................................... 15
Peptone de soja .....................................................................................
5
Chlorure de sodium ..............................................................................
5
Agar ........................................................................................................... 15
pH 7,3
Stérilisation à l’autoclave : 15 minutes à 120 °C
Ce milieu est disponible en milieu déshydraté, ainsi qu'en flacons, tubes et
boîtes de Pétri prêts à l’emploi.
Il est utilisé :
-comme milieu de subculture des germes isolés à partir de divers
échantillons ;
-comme milieu d’isolement et de dénombrement des germes mésophiles
totaux lors du contrôle de produits pharmaceutiques ou de produits cosmétiques
(cf. deuxième partie, chapitre I « Principaux micro-organismes recherchés en
routine », paragraphe 3).
La gélose trypease soja peut être additionnée de 5 % de sang défibriné stérile
(de mouton ou de cheval) (cf. deuxième partie, chapitre 10 « Streptococcus et
Enterococcus », paragraphe 5.1.2.).
4.1.2. Pour bactéries exigeantes
Certains milieux d’usage courant sont utilisés directement ou modifiés, par
addition de produits biologiques (sang, sérum, extrait globulaire...) ; ces milieux
de culture dits « enrichis » assurent alors la culture de bactéries exigeants, pour
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Stérilisation à l’autoclave à 121 ± 1 °C pendant 15 minutes.
Ce milieu est disponible en milieu déshydraté.
Préparer ce milieu en tubes ou en boîtes de Pétri, puis l’ensemencer par les
méthodes conventionnelles en fonction des besoins.
Incuber à 37 °C (en général) pendant 24 à 48 heures.
D’après le contrôle qualité de ce milieu, Staphylococcus aureus ATCC 25923,
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella Enteritidis ATCC 13076, Streptococeus bovis CIP 5623, Enterococcus faecalis var. zymogenes ATCC 29212, Bacillus cereus ATCC 9634 et Listeria monocytogenes présentent une bonne
croissance, après 24 heures à 37 °C.
► Gélose trypease soja, bioMérieux"5 SA
Ce milieu est destiné à permettre la croissance de micro-organismes qui ne
présentent pas d’exigences particulières ; grâce à son mélange de peptones, il
assure la croissance de la plupart des micro-organismes. Il correspond au milieu
gélosé B de la Pharmacopée européenne 4 (2004) pour le contrôle des produits
non stériles (recherche de micro-organismes spécifiés) et il est conforme à l'USP
XXVI (2003) pour des tests microbiologiques (cf. annexe générale 7 « Milieux
de culture utilisés en Pharmacopée »).
La formule théorique de ce milieu de culture en g/L d’eau purifiée est :
Peptone de caséine (bovin) ................................................................... 15
Peptone de soja .....................................................................................
5
Chlorure de sodium ..............................................................................
5
Agar ........................................................................................................... 15
pH 7,3
Stérilisation à l’autoclave : 15 minutes à 120 °C
Ce milieu est disponible en milieu déshydraté, ainsi qu'en flacons, tubes et
boîtes de Pétri prêts à l’emploi.
Il est utilisé :
-comme milieu de subculture des germes isolés à partir de divers
échantillons ;
-comme milieu d’isolement et de dénombrement des germes mésophiles
totaux lors du contrôle de produits pharmaceutiques ou de produits cosmétiques
(cf. deuxième partie, chapitre I « Principaux micro-organismes recherchés en
routine », paragraphe 3).
La gélose trypease soja peut être additionnée de 5 % de sang défibriné stérile
(de mouton ou de cheval) (cf. deuxième partie, chapitre 10 « Streptococcus et
Enterococcus », paragraphe 5.1.2.).
4.1.2. Pour bactéries exigeantes
Certains milieux d’usage courant sont utilisés directement ou modifiés, par
addition de produits biologiques (sang, sérum, extrait globulaire...) ; ces milieux
de culture dits « enrichis » assurent alors la culture de bactéries exigeants, pour