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7.8.2. Comment sur-exprimer un gène
La surexpression d'un gène permet aussi d'avoir des informations sur son rôle. En effet, en
général la surexpression provoque un phénotype opposé à l'inactivation. Il est possible
d'introduire par transformation plusieurs copies du gène. La méthode la plus sure est de le
mettre sur un plasmide multicopie mais ceci n'est possible que chez le nombre limité
d'organismes comme les bactéries ou les levures. Une seconde méthode consiste à
transformer les cellules avec des quantités importantes d'ADN.
Il est également possible de cloner la séquence codante du gène dans une cassette
d'expression forte. Cette dernière est constituée d'un fragment d'ADN comprenant un
promoteur fort et d'un fragment d'ADN provenant d'une région terminateur d'un gène. Vu que
la plupart des promoteurs utilisés sont non-seulement forts mais aussi constitutifs, (s'exprimer
tout le temps). Le gène sera donc non seulement fortement exprimé mais aussi dérégulé.
Figure 7.23.: Cassette permettant la sur-expression d’un gène
7.8.3. La mutagenèse insertionnelle par transformation (& le REMI) ou par
transposition.
La mutagenèse insertionnelle par transformation se base sur les propriétés de l'intégration de
l'ADN exogène introduit dans des cellules. Il est bien évident que ces évènements
d'intégration sont sélectionnés grâce à la présence sur l'ADN introduit d'un marqueur de
sélection (gène de résistance à un antibiotique, marqueur d'auxotrophie ...). Ces morceaux
d'ADN en s'insérant vont inactiver ou modifier l'expression de gènes.
Le type de mutagenèse appelée REMI pour Restriction Enzyme Mediated Insertional
mutagenesis est un modèle de cette mutagénèse insertionnelle.