64
Figure 7.8. Clonage dans le vecteur YAC
7.4. Traitement et ligature de fragments
Si le vecteur et le fragment ne sont pas digérés par la même enzyme ou des enzymes
compatibles, Il convient de rajouter un linker (ou polylinker): séquence contenant plusieurs
sites uniques pour des enzymes de restriction afin de générer des bouts complémentaires.
La ligature des fragments se fera en utilisant la ligase.
Il ya deux possibilités:
1- l’insertion du gène dans un marqueur de sélection, ce qui entrainera une inhibition
insertionnelle de ce marqueur.
2- traitement à la phosphatase alcaline qui éliminera le phosphate en position 5’, ce qui
empêche la refermeture du vecteur sur lui-même. Il ne peut se refermer qu’en se liant à un
fragment contenant 3’Pet 5’P.