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Sommaire
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Chapitre 1. Structure des acides nucléiques
5
1.1- L'acide désoxyribonucléique ou ADN
5
1.2- Les acides ribo-nucléiques « ARN »
10
1.3. Les différents types de mutations ponctuelles
12
Chapitre 2- Les enzymes agissant sur les acides nucléiques
14
2.1. Les nucléases
14
2.2. Les ligases
18
2.3. Les polymérases et enzymes apparentées
18
2.4. Enzymes modifiant l'ADN
19
2.5- Les topo-isomérases
20
Chapitre 3. Préparation des acides nucléiques: Extraction/Purification
21
3.1. Extraction d’ADN à partir du sang ou d’un tissu
21
3.2. Extraction de l’ARN
22
3.3. Séparation et visualisation de l’ADN
23
3.4. Dosage et pureté de l’ADN
26
Chapitre 4. Hybridation moléculaire
28
4.1. La température de fusion de l’ADN
29
4.2. Les facteurs qui influent sur l’hybridation
30
4.3. Marquage des acides nucléiques
32
4.4. Les Techniques d’hybridation
35
4.5. Les Puces à ADN : Microarray
40
Chapitre 5. Technique d’amplification des acides nucléiques : polymerase
chain reaction (PCR)
43
5.1. Les étapes de la PCR
43
5.2. Le mélange réactionnel
44
5.3. Aspect quantitatif de la réaction PCR
45
5.4. Les variantes de la PCR
46
Chapitre 6. Technique de Séquençage
55
6.1. Séquençage par la méthode de Sanger
55
6.2. Automatisation du séquençage
56
6.3. Le pyroséquençage
57
Chapitre 7 : Le clonage
59
7.1. Principe du clonage
59
7.2. Origine de l’ADN à cloner
59
7.3. Les vecteurs de clonage
59
7.4. Traitement et ligature de fragments
64