L’appareillage est celui utilisé dès l’origine des travaux.
Les cultures s’effectuent en fioles Erlenmeyer deux ouvertures de 50 ml pour 35 ml de
liquide total (milieu + inoculum) ou 150 ml pour 125 ml de liquide total: le choix de la
verrerie dépend de l’importance de la contamination ; les faibles contaminations incitent
aux grands volumes d’épreuve pour optimatisation de la sensibilité. L’incubation est
réalisée en bain-marie à agitation (SBK 25 SALVIS) réglé à 85 mouvements par minute,
avec translation 15 mm.
Les mesures de potentiel sont effectuées à l’aide d’électrodes combinées Au-Ag/AgCl,
KCl saturé, (AuBcl2 TACUSSEL) raccordées à un banc de mesure à six voies constitué
par un millivoltmètre à commutateur automatique (CA6 - MVIT - NX TACUSSEL) et
un enregistreur par points (192 D BRION-LEROUX). Entre chaque expérience la
désinfection des électrodes est effectuée par trempage au moins une heure dans une
solution détergente (RBS 25, des Établissements TCS, Lambersart) et rinçage abondant à
l’eau distillée stérile.
- Adaptations des conditions de culture
. Milieu de culture. Base minérale : K2HPO4 (10.5 g), FeSCO4 7H 2 0(5 mg), K2HPO4(3.5
g), CaCl 2 2H 2 0 (50 mg), NH 4 Cl (0.5 g), MnCl 2 4H 2 O (5 mg), MgS0 4 7H 2 0 (50 mg),
constituant glucidique : lactose (4 g), adjuvant de croissance : extrait de levure (2 g) milieu
tamponné à pH 7, et stérilisé à 120° C pendant 20 mn. Inhibiteur spécifique : désoxycholate de sodium (0.5 g). Indicateur d’oxydoréduction : acide lipoïque (2 mg). Le désoxycholate de sodium et l’acide lipoïque sont ajoutés extemporanément à partir d’une solution
préalablement stérilisée par filtration. Le milieu est saturé en O2 dissous avant usage.
. Incubation. On compare deux températures : 36° C : température “physiologique”,
41°C: température “sélective” appliquant la thermotolérance des bio-indicateurs.
. Expérimentation préliminaire sur matériel biologique.
L’expérimentation consiste à comparer les t(100mV) obtenus à partir d’inoculums calibrés (log x 0 : 7 à 7.5) d’un grand nombre d’espèces bactériennes représentatives de la flore
naturelle de l’eau, cultivées dans les conditions suivantes :
milieu “minimal” lactose - extrait de levure à température 36° C.
milieu “minimal” lactose - extrait de levure à température 41° C.
milieu “minimal” lactose - extrait de levure - désoxycholate de sodium à température
41° C.
Parallèlement, l’expérimentation consiste à étalonner les signaux significatifs donnés par
les espèces cultivant normalement -c’est-à-dire sans pertubation apparente- en présence
des conditions les plus hostiles: on inocule alors des dilutions d’une suspension mère
donnant des log x G compris entre 9 et 2, réparties sous volume uniforme de 0.2 ml.
- Essais de colimétrie sur les eaux naturelles
. Étalonnage des signaux
L’inoculum est apporté par un volume d’eau à analyser et l’on mesure le t( 100) correspondant étalonné par dénombrement manuel conduit parallèlement.
Sont examinés des échantillons d’eaux diversement contaminées : eaux résiduaires (E.U),
eaux de surface fortement contaminées (ESC+) ou faiblement contaminées (ESC-), eaux
profondes captées ou forées (E.P.) ; ces dernières seules ont fait l’objet de mesures
potentiométriques sur des volumes de 100 ml nécessitant des fioles de 150 ml.
La concentration de référence x 0 est déterminée manuellement, soit par inclusion en
milieu solide au désoxycholate-lactose pour les E.U. et ESC+ fortement contaminées,
soit par filtration sur membrane pour ESC- et E.P. limpides et peu ou pas contaminées.
. Signification bactériologique du signal
L’identification des populations développées dans les fioles de culture et traduites par le
signal vise à établir l’analogie entre ces populations et les bio-indicateurs dénombrés sur
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Les cultures s’effectuent en fioles Erlenmeyer deux ouvertures de 50 ml pour 35 ml de
liquide total (milieu + inoculum) ou 150 ml pour 125 ml de liquide total: le choix de la
verrerie dépend de l’importance de la contamination ; les faibles contaminations incitent
aux grands volumes d’épreuve pour optimatisation de la sensibilité. L’incubation est
réalisée en bain-marie à agitation (SBK 25 SALVIS) réglé à 85 mouvements par minute,
avec translation 15 mm.
Les mesures de potentiel sont effectuées à l’aide d’électrodes combinées Au-Ag/AgCl,
KCl saturé, (AuBcl2 TACUSSEL) raccordées à un banc de mesure à six voies constitué
par un millivoltmètre à commutateur automatique (CA6 - MVIT - NX TACUSSEL) et
un enregistreur par points (192 D BRION-LEROUX). Entre chaque expérience la
désinfection des électrodes est effectuée par trempage au moins une heure dans une
solution détergente (RBS 25, des Établissements TCS, Lambersart) et rinçage abondant à
l’eau distillée stérile.
- Adaptations des conditions de culture
. Milieu de culture. Base minérale : K2HPO4 (10.5 g), FeSCO4 7H 2 0(5 mg), K2HPO4(3.5
g), CaCl 2 2H 2 0 (50 mg), NH 4 Cl (0.5 g), MnCl 2 4H 2 O (5 mg), MgS0 4 7H 2 0 (50 mg),
constituant glucidique : lactose (4 g), adjuvant de croissance : extrait de levure (2 g) milieu
tamponné à pH 7, et stérilisé à 120° C pendant 20 mn. Inhibiteur spécifique : désoxycholate de sodium (0.5 g). Indicateur d’oxydoréduction : acide lipoïque (2 mg). Le désoxycholate de sodium et l’acide lipoïque sont ajoutés extemporanément à partir d’une solution
préalablement stérilisée par filtration. Le milieu est saturé en O2 dissous avant usage.
. Incubation. On compare deux températures : 36° C : température “physiologique”,
41°C: température “sélective” appliquant la thermotolérance des bio-indicateurs.
. Expérimentation préliminaire sur matériel biologique.
L’expérimentation consiste à comparer les t(100mV) obtenus à partir d’inoculums calibrés (log x 0 : 7 à 7.5) d’un grand nombre d’espèces bactériennes représentatives de la flore
naturelle de l’eau, cultivées dans les conditions suivantes :
milieu “minimal” lactose - extrait de levure à température 36° C.
milieu “minimal” lactose - extrait de levure à température 41° C.
milieu “minimal” lactose - extrait de levure - désoxycholate de sodium à température
41° C.
Parallèlement, l’expérimentation consiste à étalonner les signaux significatifs donnés par
les espèces cultivant normalement -c’est-à-dire sans pertubation apparente- en présence
des conditions les plus hostiles: on inocule alors des dilutions d’une suspension mère
donnant des log x G compris entre 9 et 2, réparties sous volume uniforme de 0.2 ml.
- Essais de colimétrie sur les eaux naturelles
. Étalonnage des signaux
L’inoculum est apporté par un volume d’eau à analyser et l’on mesure le t( 100) correspondant étalonné par dénombrement manuel conduit parallèlement.
Sont examinés des échantillons d’eaux diversement contaminées : eaux résiduaires (E.U),
eaux de surface fortement contaminées (ESC+) ou faiblement contaminées (ESC-), eaux
profondes captées ou forées (E.P.) ; ces dernières seules ont fait l’objet de mesures
potentiométriques sur des volumes de 100 ml nécessitant des fioles de 150 ml.
La concentration de référence x 0 est déterminée manuellement, soit par inclusion en
milieu solide au désoxycholate-lactose pour les E.U. et ESC+ fortement contaminées,
soit par filtration sur membrane pour ESC- et E.P. limpides et peu ou pas contaminées.
. Signification bactériologique du signal
L’identification des populations développées dans les fioles de culture et traduites par le
signal vise à établir l’analogie entre ces populations et les bio-indicateurs dénombrés sur
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