Chapitre III : Matériel et Méthodes
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VI.2.1.4. Mesure des intensités de fluorescence
Les concentrations des hydrocarbures aromatiques polycycliques sont déterminées à partir de
la courbe d’étalonnage. Les conditions opératoires à la lecture des intensités de fluorescence
(IF) sont les suivantes :
 L’analyse de l’échantillon nécessite une longueur d’onde d’excitation de 310 nm.
 L’émission de fluorescence est mesurée entre 310 et 500nm pour des longueurs
d’ondes d’émission fixées à 360 nm, 380nm et 410 nm avec un pic d’absorption
maximale à 360 nm pour les hydrocarbures aromatiques.
 Ouverture des fentes d’excitation et d’émission respectivement égale à 2 nm et 5 nm.
 Plaçant une fraction de l’extrait dans une cuve en quartz de 1cm de trajet optique.
L’intensité de fluorescence (IF) est proportionnelle à la concentration C de l’échantillon dans
la gamme étalon de réponse linéaire du spectrofluorométrie, déterminée par la courbe
d’étalonnage (figure 18). Elle permet d’établir le tracé d’une droite d’étalonnage pour chaque
longueur d’onde d’émission.
Les droites d’étalonnage ont la forme suivante :
IF : intensité de fluorescence en unité arbitraire U.A
C : concentration en hydrocarbures aromatiques polycycliques (en μg/ml)
a : pente de la droite
IF = a C…………………. (1)