Chapitre III
Matériels et méthodes
32
III.2.3.1.
Principe de dosage des sels nutritifs
La méthode utilisée pour le dosage des sels nutritifs (ammonium, nitrites, nitrates,
orthophosphates et silicates) est basée sur une réaction de coloration. En effet, ces sels
réagissent dans certaines conditions (température, pH, présence de catalyseurs,…) avec des
réactifs spécifiques pour donner une coloration absorbant la lumière à une certaine longueur
d’onde (λ).
III.2.3.2.
Analyse automatique des sels nutritifs
III.2.3.2.1.
Dosage des nitrites
Les nitrites (NO2-) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide
pH<2. Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé
azoïque de couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Aminot , et al., 2004)
III.2.3.2.2.
Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO3
-
) en nitrites (NO2
-
) par le passage de
l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre. Les nitrites (en
réalité NO2
- + NO3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon la méthode
précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites déterminés
directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver les
concentrations des nitrates (Rodier, et al., 1996).
III.2.3.2.3.
Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bain-marie),
les ions orthophosphates (PO4
3) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour former un
complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique. (Aminot ,
et al., 2004) Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption à 880 nm.
III.2.3.2.4.
Dosage du silicium dissous
Dans l’eau de mer, le silicium dissous se trouve à 95 % sous forme d’acide orthosilicique
(Si(OH)4) (Aminot, 1983). Cette forme réagit avec le molybdate d’ammonium en milieu
acide pour former un complexe silicomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique en
un composé coloré en bleu absorbant à 810 nm . On y ajoute l’acide oxalique pour éviter les
interférences des phosphates.
Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour
chaque élément à analyser (voir annexe 2).
Les droites d’étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en utilisant les
concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic correspondantes.
Tableau 7 « annexe 2»
Matériels et méthodes
32
III.2.3.1.
Principe de dosage des sels nutritifs
La méthode utilisée pour le dosage des sels nutritifs (ammonium, nitrites, nitrates,
orthophosphates et silicates) est basée sur une réaction de coloration. En effet, ces sels
réagissent dans certaines conditions (température, pH, présence de catalyseurs,…) avec des
réactifs spécifiques pour donner une coloration absorbant la lumière à une certaine longueur
d’onde (λ).
III.2.3.2.
Analyse automatique des sels nutritifs
III.2.3.2.1.
Dosage des nitrites
Les nitrites (NO2-) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide
pH<2. Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé
azoïque de couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (Aminot , et al., 2004)
III.2.3.2.2.
Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO3
-
) en nitrites (NO2
-
) par le passage de
l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre. Les nitrites (en
réalité NO2
- + NO3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon la méthode
précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites déterminés
directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver les
concentrations des nitrates (Rodier, et al., 1996).
III.2.3.2.3.
Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bain-marie),
les ions orthophosphates (PO4
3) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour former un
complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique. (Aminot ,
et al., 2004) Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum d’absorption à 880 nm.
III.2.3.2.4.
Dosage du silicium dissous
Dans l’eau de mer, le silicium dissous se trouve à 95 % sous forme d’acide orthosilicique
(Si(OH)4) (Aminot, 1983). Cette forme réagit avec le molybdate d’ammonium en milieu
acide pour former un complexe silicomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique en
un composé coloré en bleu absorbant à 810 nm . On y ajoute l’acide oxalique pour éviter les
interférences des phosphates.
Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour
chaque élément à analyser (voir annexe 2).
Les droites d’étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en utilisant les
concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic correspondantes.
Tableau 7 « annexe 2»