Chapitre II : Matériels et méthodes
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 Rajouter le T.T.C.
 Couler la gélose contenant le T.T.C dans les boîtes de Pétri et laisser solidifier.
Figure 13 : Préparation du milieu de culture (gélose stérile de Slanetz et Bartley) (Benmokhtar.2016).
D. Filtration sur membrane et incubation :
 Stttilisee la aape de filttatioo à l’aide d’uu Bee Buusee.
 PPPlevee uue eeeeaae de soo eeeallage à l’aide d’uue piiie stttile et la ddposee suu la
plaque poreuse de la rampe de filtration.
 Agitee soiggeuseeeet le tuue ooteeaat la dilutioo d’eau à aaalsee et la veesee.
 Ouvrir le robinet de la rampe pour laisse l’eau s’’’oulee.
 DDs ue la uaatitt d’eau est filttte, ppplevee la eeeeaae avee uue piiie stttile.
 Placer le filtre dans la boîte de Pétri contenant la gélose Slanetz et Bartley avec TTC.
 Mettte la oîte de PPtti daas l’iiiuuateuu à
°C peedaat 4 ± 4 h, couvercle vers le bas.
E.Dénombrement, confirmation et expression du résultat :
 Après incubation, les entérocoques intestinaux typiques donnent des colonies bombées de
taille ooeeee, ouge, aaaoo ou ose au eette ou suu l’eeseeele de la olooie.
 ttaasfffee le filtte au ooee d’uue piiie stttile, saas etouuueeeet, suu la oîte de PPtti
contenant la gélose B.E.A qui a été préchauffée au préalable à 44° C pendant au moins 20
minutes.
 Faire incuber à 44 ± 0,5 °C pendant 2h. Retirer la boîte de Pétri et compter les colonies
eetouuues d’uu halo oii iidiiuaat l’essuliie positive.
 La esuue est à eeppiiee ee UFC pouu
l d’eau (ISO 7899-2 NA 766).
La technique de dénombrement des entérocoques est représentée dans la figure 14.