Chapitre III : Applications des techniques de génétique
moléculaire dans l’identification des poissons
72
Application de PCR-RFLP:
Le potentiel de cette technique a été mis en évidence pour l’identification des espèces
de poisson en basant sur l’amplification d’une partie spécifique du génome mitochondrial
(tRNA
Glu
/cytochrome b) Afin de distinguer entre diverses espèces, les longs fragments de
464 paires de bases obtenus par PCR sont coupés avec différentes endonucléases, ce qui
donne des fragments de restriction spécifiques de l’espèce. Cette méthode est applicable pour
distinguer, le saumon de l’Atlantique des diverses espèces de saumon du Pacifique(Wolf, et
al., 2000).
Lin et Hwangont utilisé cette technique pour identifier huit espèces de scombridés.
Deux paires d'amorces ont été conçues pour amplifier 126 et 146 pb du gène du cytochrome b
mitochondrial et cinq enzymes de restriction ont été déterminées pour analyser des fragments
de courte longueur. La méthode a été appliquée avec succès à l'authentification des espèces
dans 18 thons en conserve commerciale(Teletchea, 2009).
7. Application de la techniques RAPD :
L’analyse RAPD a fait l’objet d’une étude faite par (Chaoui, 2007) dans le cadre d’un
projet de coopération franco-algérien (Accord-programme de (coopération CMEP No 04
MDU 628), intitulé « Ichtyofaune côtière du golfe d’Annaba : diversité génétique et biologie
halieutique » dont deux systèmes RAPD ont été utilisé pour comparer, des échantillons de
daurades, marines et lagunaires, originaires du sud et du nord de la Méditerranée. Cette
démarche intégrée permet d’identifier les stocks au sens génétique pour une évaluation juste
de la biomasse existante.
deux amorces RAPD : A-01 (5_-AGGGGTCTTG-3_) et A-10 (5_GTGATCGCAG-3_) ,
synthétisées par la société Operon Technologies Inc, ont été utilisé pour l’amplification.
La PCR est réalisée dans un volume réactionnel de 25 μl, contenant 5 μl d’extrait
D’ADN, 2 mM de MgCl2, 0,4 mM de chaque dNTP, 0,6 μM d’amorce, 0,15 mg/ml de
bovineserum albumine (BSA), 0,1 U de Taq et 1X buffer (Promega Corp. Madison, WI). La
PCR est réalisée dans un thérmocycleur Gene Amp. ®PCR System 9700
(AppliedBiosystems).
moléculaire dans l’identification des poissons
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Application de PCR-RFLP:
Le potentiel de cette technique a été mis en évidence pour l’identification des espèces
de poisson en basant sur l’amplification d’une partie spécifique du génome mitochondrial
(tRNA
Glu
/cytochrome b) Afin de distinguer entre diverses espèces, les longs fragments de
464 paires de bases obtenus par PCR sont coupés avec différentes endonucléases, ce qui
donne des fragments de restriction spécifiques de l’espèce. Cette méthode est applicable pour
distinguer, le saumon de l’Atlantique des diverses espèces de saumon du Pacifique(Wolf, et
al., 2000).
Lin et Hwangont utilisé cette technique pour identifier huit espèces de scombridés.
Deux paires d'amorces ont été conçues pour amplifier 126 et 146 pb du gène du cytochrome b
mitochondrial et cinq enzymes de restriction ont été déterminées pour analyser des fragments
de courte longueur. La méthode a été appliquée avec succès à l'authentification des espèces
dans 18 thons en conserve commerciale(Teletchea, 2009).
7. Application de la techniques RAPD :
L’analyse RAPD a fait l’objet d’une étude faite par (Chaoui, 2007) dans le cadre d’un
projet de coopération franco-algérien (Accord-programme de (coopération CMEP No 04
MDU 628), intitulé « Ichtyofaune côtière du golfe d’Annaba : diversité génétique et biologie
halieutique » dont deux systèmes RAPD ont été utilisé pour comparer, des échantillons de
daurades, marines et lagunaires, originaires du sud et du nord de la Méditerranée. Cette
démarche intégrée permet d’identifier les stocks au sens génétique pour une évaluation juste
de la biomasse existante.
deux amorces RAPD : A-01 (5_-AGGGGTCTTG-3_) et A-10 (5_GTGATCGCAG-3_) ,
synthétisées par la société Operon Technologies Inc, ont été utilisé pour l’amplification.
La PCR est réalisée dans un volume réactionnel de 25 μl, contenant 5 μl d’extrait
D’ADN, 2 mM de MgCl2, 0,4 mM de chaque dNTP, 0,6 μM d’amorce, 0,15 mg/ml de
bovineserum albumine (BSA), 0,1 U de Taq et 1X buffer (Promega Corp. Madison, WI). La
PCR est réalisée dans un thérmocycleur Gene Amp. ®PCR System 9700
(AppliedBiosystems).