Chapitre 3
Matériel et Méthodes
50
3.6.4. Recherche et dénombrement de Pseudomonas aeruginosa
Après filtration, la membrane est prélevée et déposée sur gélose au cétrimide. L’incubation des
boites de pétri est effectuée à 36 ± 2 °C pendant 44 ± 4 h (Figure 3.6).
Après la période d’incubation, le dénombrement de toutes les colonies est réalisé. Les colonies
produisant pigmentation bleu-vert (pyocyanine) sont considérées comme Pseudomonas
aeruginosa confirmés (Nombre P).
Les colonies ne produisant pas de pyocyanine sont dénombrées, puis examinées sous
rayonnement ultraviolet. S’ils donnent lieu à une fluorescence, elles sont considérées comme
Pseudomonas aeruginosa présumés (nombre F). Leur confirmation est réalisée en recherchant
la production de la pyocyanine sur gélose inclinée King A. La lecture du résultat a été effectuée
après 24, 48 et 72 heures ainsi qu’après cinq jours. Le résultat est positif s’il y a apparition
d’une zone de couleur bleu à verte (nombre cF).
Les autres colonies brun-rougeâtre sont considérées comme Pseudomonas aeruginosa présumés (Nombre nR). Leur confirmation a été consolidée, sur cellule jeunes, par un test d’oxydase.
L’apparition d’une fluorescence sous lampe UV (Annexe 3- Figure 4) est recherchée, après
incubation sur gélose inclinée King B à 36 ± 2 °C pendant cinq jours maximum (nombre cR)
Expression des résultats
Le résultat final sera exprimé selon l’équation suivante :
í µí±µ = í µí±· + í µí± ∗ (
í µí²í µí±í µí²í µí²
) + í µí±¹ ∗ (
í µí²í µí±¹
í µí²í µí±¹
)
Avec :
P : nombre de colonies bleu-vert ; toutes comptées cibles confirmées ;
F : nombre de colonies fluorescentes ;
R : nombre de colonies brun-rougeâtre ;
nf : nombre de colonies fluorescentes produisant de la pyocyanine sur milieu King A ;
cF : nombre de colonies fluorescentes positives pour la production de la pyocyanine ;
nR : nombre de colonies brun-rougeâtre examinées pour oxydase et fluorescence sur milieu
de King B ;
cR : nombre de colonies brun-rougeâtre positives pour la production d’oxydase et fluorescence sur milieu de King B.
Matériel et Méthodes
50
3.6.4. Recherche et dénombrement de Pseudomonas aeruginosa
Après filtration, la membrane est prélevée et déposée sur gélose au cétrimide. L’incubation des
boites de pétri est effectuée à 36 ± 2 °C pendant 44 ± 4 h (Figure 3.6).
Après la période d’incubation, le dénombrement de toutes les colonies est réalisé. Les colonies
produisant pigmentation bleu-vert (pyocyanine) sont considérées comme Pseudomonas
aeruginosa confirmés (Nombre P).
Les colonies ne produisant pas de pyocyanine sont dénombrées, puis examinées sous
rayonnement ultraviolet. S’ils donnent lieu à une fluorescence, elles sont considérées comme
Pseudomonas aeruginosa présumés (nombre F). Leur confirmation est réalisée en recherchant
la production de la pyocyanine sur gélose inclinée King A. La lecture du résultat a été effectuée
après 24, 48 et 72 heures ainsi qu’après cinq jours. Le résultat est positif s’il y a apparition
d’une zone de couleur bleu à verte (nombre cF).
Les autres colonies brun-rougeâtre sont considérées comme Pseudomonas aeruginosa présumés (Nombre nR). Leur confirmation a été consolidée, sur cellule jeunes, par un test d’oxydase.
L’apparition d’une fluorescence sous lampe UV (Annexe 3- Figure 4) est recherchée, après
incubation sur gélose inclinée King B à 36 ± 2 °C pendant cinq jours maximum (nombre cR)
Expression des résultats
Le résultat final sera exprimé selon l’équation suivante :
í µí±µ = í µí±· + í µí± ∗ (
í µí²í µí±í µí²í µí²
) + í µí±¹ ∗ (
í µí²í µí±¹
í µí²í µí±¹
)
Avec :
P : nombre de colonies bleu-vert ; toutes comptées cibles confirmées ;
F : nombre de colonies fluorescentes ;
R : nombre de colonies brun-rougeâtre ;
nf : nombre de colonies fluorescentes produisant de la pyocyanine sur milieu King A ;
cF : nombre de colonies fluorescentes positives pour la production de la pyocyanine ;
nR : nombre de colonies brun-rougeâtre examinées pour oxydase et fluorescence sur milieu
de King B ;
cR : nombre de colonies brun-rougeâtre positives pour la production d’oxydase et fluorescence sur milieu de King B.