Chapitre 3
Matériel et Méthodes
44
(Annexe 3- Figure 3). La bouteille est mise dans une armoire thermostatée réglé à 20°C et
munie d’une agitation automatique. La consommation d’oxygène induit une production de CO2
absorbé par un piège à soude créant ainsi une dépression enregistrée par le manomètre (Resek,
2002). Cette dépression est liée par corrélation à la DBO en fonction du volume de l’échantillon.
La lecture est faite après cinq jours d’incubation (Rodier et al., 2009).
3.6. Analyse bactériologique par filtration sur membrane
Afin d’évaluer la qualité bactériologique, une estimation des coliformes totaux, des coliformes
thermotolérants, d’E. coli, des entérocoques, ainsi que certains germes pathogènes à savoir
Staphylococcus aurerus, Pseudomonas aerogenosa et Salmonella sp. a été réalisée par filtration
sur membrane.
Le principe de la méthode consiste à la filtration de 100 ml de l’échantillon ou de ses dilutions
sur une membrane en esters de cellulose, de porosité 0,45 μm, placée dans une rampe de
filtration en inox de six postes dans des conditions stériles (Rodier et al., 2009). La membrane
est déposée à la surface d’un milieu de culture choisi selon la recherche.
3.6.1. Recherche et dénombrement des coliformes
Dans des conditions stériles, la membrane est déposée sur la plaque poreuse. Un volume de 100
ml d’échantillon agité soigneusement est filtré. Après filtration, la membrane est déposée à la
surface d’une gélose au Tergitol. L’incubation du milieu est effectuée à 37 ± 1°C pendant 2448h pour les coliformes totaux, alors que pour les coliformes thermotolérants, elle est effectuée
à 44 ± 0,5°C (Rodier, 2009).
Les colonies caractéristiques, qui se présentent sous forme de colonies lisses légèrement
bombées à contours réguliers et pigmentées en jaune, sont dénombrées. La confirmation des
coliformes et la recherche d’E.coli ont été réalisé par repiquage sur milieu T.S.A suivi d’un test
d’oxydase et ensemencement d’un bouillon au Tryptophane afin de mettre en évidence la
production d’indole. La Figure 3.2 illustre toutes les étapes suivies.
Matériel et Méthodes
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(Annexe 3- Figure 3). La bouteille est mise dans une armoire thermostatée réglé à 20°C et
munie d’une agitation automatique. La consommation d’oxygène induit une production de CO2
absorbé par un piège à soude créant ainsi une dépression enregistrée par le manomètre (Resek,
2002). Cette dépression est liée par corrélation à la DBO en fonction du volume de l’échantillon.
La lecture est faite après cinq jours d’incubation (Rodier et al., 2009).
3.6. Analyse bactériologique par filtration sur membrane
Afin d’évaluer la qualité bactériologique, une estimation des coliformes totaux, des coliformes
thermotolérants, d’E. coli, des entérocoques, ainsi que certains germes pathogènes à savoir
Staphylococcus aurerus, Pseudomonas aerogenosa et Salmonella sp. a été réalisée par filtration
sur membrane.
Le principe de la méthode consiste à la filtration de 100 ml de l’échantillon ou de ses dilutions
sur une membrane en esters de cellulose, de porosité 0,45 μm, placée dans une rampe de
filtration en inox de six postes dans des conditions stériles (Rodier et al., 2009). La membrane
est déposée à la surface d’un milieu de culture choisi selon la recherche.
3.6.1. Recherche et dénombrement des coliformes
Dans des conditions stériles, la membrane est déposée sur la plaque poreuse. Un volume de 100
ml d’échantillon agité soigneusement est filtré. Après filtration, la membrane est déposée à la
surface d’une gélose au Tergitol. L’incubation du milieu est effectuée à 37 ± 1°C pendant 2448h pour les coliformes totaux, alors que pour les coliformes thermotolérants, elle est effectuée
à 44 ± 0,5°C (Rodier, 2009).
Les colonies caractéristiques, qui se présentent sous forme de colonies lisses légèrement
bombées à contours réguliers et pigmentées en jaune, sont dénombrées. La confirmation des
coliformes et la recherche d’E.coli ont été réalisé par repiquage sur milieu T.S.A suivi d’un test
d’oxydase et ensemencement d’un bouillon au Tryptophane afin de mettre en évidence la
production d’indole. La Figure 3.2 illustre toutes les étapes suivies.