Chapitre II :
Matériel et méthodes.
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II.5.2 Recherche des Staphylocoques pathogènes
Principe (Bertrand J et al., 2011): Le milieu Chapman est un milieu classique qui
permet d’une part, l'isolement sélectif des staphylocoques sur la base de leur
tolérance à de fortes teneurs de NaCl et d’autre part, à la différenciation de la
souche Staphylococcus aureus, par la mise en évidence de la dégradation du
mannitol.
Mode opératoire : 0.1ml d’échantillon a été étalé à la surface du milieu Chapman
avec une incubation à 37°C pendant24-48 h.
Lecture : Sur ce milieu, les colonies de Staphylococcus aureus apparaissent jaune,
dû à l'attaque du mannitol. Les autres espèces de staphylocoques donnent des
colonies généralement plus petites, rosées et n'entraînent pas de virage de couleur
du milieu.
La confirmation des espèces a été effectuée par les tests suivants : coloration de
Gram, la catalase. La pathogénicité des Staphylococcus aureus a été testée par le
test de la coagulase.
II.5.3 Recherche des bactéries lactiques:
Mode opératoire (Idoui et al., 2009) : 2.5g de l’échantillon est placé dans un tube
stérile contenant 2.1 ml d'eau physiologique stérile et incubé à 45°C (6h). La
séparation des deux phases est ensuite réalisée par centrifugation pendant 10
minutes à 3500 rpm. A l'aide d'une pipette stérile, 1ml de la phase aqueuse est
prélevé et introduit dans un tube à essai contenant 9ml d'eau physiologique stérile.
Ainsi, s'obtient la dilution 10
-1
Isolement : Il se fait sur gélose MRS (deMan, Rogosa, Sharpe) préalablement
coulée et solidifiée dans des boites de Pétri, L’incubation à 37°C pendant 24 h à
48h en conditions d’anaérobie
Purification : Elle consiste à réaliser des repiquages successifs sur gélose MRS,
avec une incubation à 37°C pendant 24h, jusqu’à l’obtention de colonies de même
taille, même forme et même couleur, renseignant sur la pureté des souches.
Examen microscopique : L’examen macroscopique des colonies sur gélose MRS,
a pour but d’écarter tout ce qui ne peut pas être une bactérie lactique. Les isolats
seront soumis à une coloration de Gram. Celle-ci permet de différencier les
bactéries à Gram positif de celles à Gram négatif, ainsi leur forme et mode de
regroupement.
Matériel et méthodes.
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II.5.2 Recherche des Staphylocoques pathogènes
Principe (Bertrand J et al., 2011): Le milieu Chapman est un milieu classique qui
permet d’une part, l'isolement sélectif des staphylocoques sur la base de leur
tolérance à de fortes teneurs de NaCl et d’autre part, à la différenciation de la
souche Staphylococcus aureus, par la mise en évidence de la dégradation du
mannitol.
Mode opératoire : 0.1ml d’échantillon a été étalé à la surface du milieu Chapman
avec une incubation à 37°C pendant24-48 h.
Lecture : Sur ce milieu, les colonies de Staphylococcus aureus apparaissent jaune,
dû à l'attaque du mannitol. Les autres espèces de staphylocoques donnent des
colonies généralement plus petites, rosées et n'entraînent pas de virage de couleur
du milieu.
La confirmation des espèces a été effectuée par les tests suivants : coloration de
Gram, la catalase. La pathogénicité des Staphylococcus aureus a été testée par le
test de la coagulase.
II.5.3 Recherche des bactéries lactiques:
Mode opératoire (Idoui et al., 2009) : 2.5g de l’échantillon est placé dans un tube
stérile contenant 2.1 ml d'eau physiologique stérile et incubé à 45°C (6h). La
séparation des deux phases est ensuite réalisée par centrifugation pendant 10
minutes à 3500 rpm. A l'aide d'une pipette stérile, 1ml de la phase aqueuse est
prélevé et introduit dans un tube à essai contenant 9ml d'eau physiologique stérile.
Ainsi, s'obtient la dilution 10
-1
Isolement : Il se fait sur gélose MRS (deMan, Rogosa, Sharpe) préalablement
coulée et solidifiée dans des boites de Pétri, L’incubation à 37°C pendant 24 h à
48h en conditions d’anaérobie
Purification : Elle consiste à réaliser des repiquages successifs sur gélose MRS,
avec une incubation à 37°C pendant 24h, jusqu’à l’obtention de colonies de même
taille, même forme et même couleur, renseignant sur la pureté des souches.
Examen microscopique : L’examen macroscopique des colonies sur gélose MRS,
a pour but d’écarter tout ce qui ne peut pas être une bactérie lactique. Les isolats
seront soumis à une coloration de Gram. Celle-ci permet de différencier les
bactéries à Gram positif de celles à Gram négatif, ainsi leur forme et mode de
regroupement.