CHAPITRE III
MATERIELS ET METHODES
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Le test a été effectué à l’aide des disques oxydases. Le disque est placé sur une lame,
une colonie bien isolée est déposée sur sa surface. Une coloration violette apparaisse après 30
secondes en cas de réaction positive.
 Coloration de Gram
La coloration de Gram est une coloration différentielle qui permet de diviser les
bactéries en deux grands groupes : Gram positives (forte proportion de lipide 20 %) et Gram
négatives (faible trace de lipide).
La méthodologie est la suivante. Préparation d’un frottis fixé à la chaleur, ajout sur le
frottis de quelques gouttes de la solution de violet de gentiane, l’excès de violet est jeté après
une minute d’action. Le frottis coloré est recouvert rapidement de lugol de gram, l’excès est
jeté au bout d’une minute. La lame est ensuite décolorée à l’alcool à 95 % pendant quelque
seconde, jusqu’à ce que l’alcool ajouté n’ait plus d’action décolorante. Après rinçage avec de
l’eau de robinet, puis le frottis est recoloré à la Fuschine et rincé avec l’eau de robinet après
une minute d’action, séchage de la lame. Les bactéries Gram positives apparaissent en violet
et celles Gram négatives en rose (GUIRAUD, 2003).
 Galerie API 20E
La galerie API 20E est une galerie qui permet d’identifier des entérobactéries. Cette
galerie est composée de 20 microtubes (surmontés de cupules) contenant des substrats
déshydratés, qui permettent de réaliser 21 tests biochimiques du métabolisme respiratoire,
glucidique et protéique (DELARRAS, 2008).
Remarque : le mode opératoire est indiqué en ANNEXE III.