Chapitre III : Résultats et discussion.
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III.2. Isolement sur milieu gélosé et dénombrement
Après enrichissement et pour pouvoir observer et caractériser macroscopiquement les
bactéries présentes dans l’échantillon, nous avons procéder à l’isolement sur milieu gélosé.
Au bout d’une semaine d’incubation à 30°C, nous avons procédé au comptage du nombre
des colonies isolées dans les boites de pétri sachant que pour chaque station et pour chaque
dilution nous avons ensemencé en déplicat.
Nous avons constaté que pour la dilution 10
-2 , toutes les boîtes étaient indénombrables (>300
colonies), cependant le nombre de colonies a diminué pour les dilutions 10
-4 pour les deux
matrices (eau et sédiment) ce qui est tout à fait normal. Nous avons aussi remarqué une
lenteur de croissance par rapport au milieu liquide, ceci peut être expliqué par le fait que les
bactéries ne sont pas en contact direct avec l’hydrocarbure.
Les colonies phénotypiquement différentes obtenues à partir des boites ont été ré-isoler sur
milieu solide, afin de les purifier. Les colonies obtenues sont toutes de formes circulaires, de
petites tailles, à contour régulier, de couleurs blanches, jaunes, rouges orangées et
transparentes. Les colonies pour la plupart sont opaques, à surfaces lisses et à consistances
crémeuses. Ces phénotypes mis à part les colonies rouges orangées correspondent aux
phénotypes des bactéries marines hydrocarbonoclastes. Nous avons noté aussi que les
colonies rouges orangées obtenues, après plusieurs ré-isolement sur milieu gélosé,
devenaient blanchâtres, ceci peut être expliqué par la présence du fer dans le milieu qui leur
a conféré cette couleur.
Nous avons sélectionné 93 colonies à partir des différentes boites des différentes stations et
de différentes sources de carbone (pétrole brut et alcane) afin de les purifier (ANNEXE III).
Pour s’assurer que les colonies purifiées ont utilisé les hydrocarbures comme source de
carbone, nous avons procédé à l’inoculation de ces dernières dans un milieu liquide frais
(ONR7 additionné à 1% d’hydrocarbure), cette étape est aussi importante pour l’élimination
des bactéries autotrophes.
Après incubation, nous avons constaté que ce n’est pas toutes les souches qui ont manifesté
une croissance (Figure III.3). En effet 75 souches sur 93 (Figure III.4) ont manifesté une
croissance bactérienne apparente.
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III.2. Isolement sur milieu gélosé et dénombrement
Après enrichissement et pour pouvoir observer et caractériser macroscopiquement les
bactéries présentes dans l’échantillon, nous avons procéder à l’isolement sur milieu gélosé.
Au bout d’une semaine d’incubation à 30°C, nous avons procédé au comptage du nombre
des colonies isolées dans les boites de pétri sachant que pour chaque station et pour chaque
dilution nous avons ensemencé en déplicat.
Nous avons constaté que pour la dilution 10
-2 , toutes les boîtes étaient indénombrables (>300
colonies), cependant le nombre de colonies a diminué pour les dilutions 10
-4 pour les deux
matrices (eau et sédiment) ce qui est tout à fait normal. Nous avons aussi remarqué une
lenteur de croissance par rapport au milieu liquide, ceci peut être expliqué par le fait que les
bactéries ne sont pas en contact direct avec l’hydrocarbure.
Les colonies phénotypiquement différentes obtenues à partir des boites ont été ré-isoler sur
milieu solide, afin de les purifier. Les colonies obtenues sont toutes de formes circulaires, de
petites tailles, à contour régulier, de couleurs blanches, jaunes, rouges orangées et
transparentes. Les colonies pour la plupart sont opaques, à surfaces lisses et à consistances
crémeuses. Ces phénotypes mis à part les colonies rouges orangées correspondent aux
phénotypes des bactéries marines hydrocarbonoclastes. Nous avons noté aussi que les
colonies rouges orangées obtenues, après plusieurs ré-isolement sur milieu gélosé,
devenaient blanchâtres, ceci peut être expliqué par la présence du fer dans le milieu qui leur
a conféré cette couleur.
Nous avons sélectionné 93 colonies à partir des différentes boites des différentes stations et
de différentes sources de carbone (pétrole brut et alcane) afin de les purifier (ANNEXE III).
Pour s’assurer que les colonies purifiées ont utilisé les hydrocarbures comme source de
carbone, nous avons procédé à l’inoculation de ces dernières dans un milieu liquide frais
(ONR7 additionné à 1% d’hydrocarbure), cette étape est aussi importante pour l’élimination
des bactéries autotrophes.
Après incubation, nous avons constaté que ce n’est pas toutes les souches qui ont manifesté
une croissance (Figure III.3). En effet 75 souches sur 93 (Figure III.4) ont manifesté une
croissance bactérienne apparente.