Chapitre II : Matériel et méthode.
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II.4.4.2 Mode opératoire
Pour chaque souche bactérienne il faut d’abord préparer 8 tubes à essai stériles 7 tubes pour
les différents types d’hydrocarbures qui sont : pétrole brute ; alcane ; toluène ; xylène ; C26 ;
C28 ; benzène ; et 1 tube pour le contrôle négatif (C⁻)
- Remplir chaque tube à essai avec 5 ml de milieu ONR7 ;
- Prélever une colonie bien isolée de la souche bactérienne développée sur milieu
solide après réisolement par l’anse de platine ;
- Ensemencer chaque tube par la même culture bactérienne ;
- Ajouter dans chaque tube 50µl de différents types d’hydrocarbures ;
-
- Agiter les tubes à l’aide d’un vortex ;
- Incuber à 30°C pendant une semaine.
- Mesurer la densité optique (λ=600nm).
II.4.5 Indice d’émulsion E24
C’est le paramètre qui permet d’estimer le pouvoir émulsifiant des biosurfactants (ALI
AHMED,2011) l’eau est utilisée communément comme un indicateur de l’activité de
surface (ABU RUAIDA et al., 1991).
II.4.5.1 Principe
Il se mesure selon la technique de (COOPER et GOLDENBERG,1987) en introduisant du
tétradécane de même volume que la culture bactérienne dans un tube puis les agiter au vortex
pendant 2 mn à vitesse maximale. Après 24 heures, on obtient trois phases (Figure II.7) ; le
moût de fermentation, l’émulsion et le tétradécane de bas en haut, on mesure ensuite la
hauteur de l’émulsion (He) et la hauteur totale (Ht) et l’indice d’émulsification est donné par
la formule suivante :
E24 (%) = (He / Ht) x 100