Chapitre II : Matériel et méthode.
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II.3.4 Dilution (10⁻ 4)
II.3.4.1 Mode opératoire
Prélever 1ml de la culture bactérienne (10⁻²) et la verser dans un flacon en verre stérile
remplis de 99ml de ONR7, puis ajouter 100µl d’hydrocarbure et les incuber à 30°C avec
agitation pendant 10 jours.
II.3.5 Dénombrement sur milieu gélosé
II.3.5.1 Dénombrement
Le dénombrement microbiologique sur milieu solide est une technique scientifique de
comptage des bactéries. Ce procédé est avant tout destiné pour connaître la présence ou non
de ces bactéries dans l’eau de mer. Afin d’effectuer le dénombrement en milieu solide, le
nombre des colonies bactériennes doit être inférieure à 300 et supérieure à 30 colonies.
II.3.5.2 Etalement liquide-solide
Afin de décrire phénotypiquement les souches obtenues à partir de l’enrichissement, il est
nécessaire de passer par l’étape de l’étalement sur milieu solide.
II.3.5.2.1 Mode opératoire
- Prélever des aliquotes 100µl de culture liquide à partir des flacons d’enrichissement ;
- Verser l’inoculum sur le centre de la surface de la gélose ;
- Etaler à l’aide d’un râteau déjà préparé à partir d’une pipette pasteur l’inoculum sur
toute la surface de la gélose ;
- Laisser sécher.
- Ajouter 100µl d’hydrocarbure (pétrole ou alcane) sur le couvercle de la boite soit en
utilisant des embouts stériles contenant l’hydrocarbure et qui sont directement mis
sur le couvercle de la boite, soir sur du papier filtre.
- Fermer la boite à l’aide d’un parafilm pour éviter toute évaporation d’hydrocarbure.
- Etiqueter et incuber les boites dans l’étuve à 37°Cjusqu’à croissance bactérienne