Chapitre II : Matériel et méthode.
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Volume final
100 ml
- Déplacer devant un bec bunsen la quantité désirée de solution de FeCl2 dans un
Falcon 50 ml. Ajouter de l’eau distillée ;
- Stériliser la solution par filtration à travers le filtre de 0,22 µm directement dans la
solution 2 ;
- Verser le tout dans la solution 1.
II.3.3 Enrichissement
Pour l’enrichissement et l’isolement des bactéries marines hydrocarbonoclastes nous avons
suivi le protocole de (CATANIA.V et al., 2014).
Le lendemain du prélèvement Les échantillons ont été enrichis en additionnant 1%
d’échantillon et 0,1% de pétrole brut (source de carbone) au milieu de culture ONR7 (99ml).
II.3.3.1 Mode opératoire
- Remplir 99ml de milieu ONR7 dans des flacons stériles ;
- Ajouter 1ml de l’échantillon d’eau de mer pour la matrice eau et 1g de la matrice
sédiment ;
- Ajouter 100µl de source de carbone, pour cela nous avons utilisé du pétrole brut et
un mélange d’alcane (C14+C16+C18) ;
- Préparer le contrôle négatif sans échantillon pour confirmer et comparer les résultats
(99ml de l’ONR7+ 100µl d’hydrocarbure) ;
- Etiqueter les flacons et les incuber avec agitation à 30°C pendant 10 jours.