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Annexe III
3 Milieu de culture
3.1 Principe
Un milieu de culture doit satisfaire à toutes les exigences nutritives des micro-organismes :
- apport de la source d'énergie, de carbone, d'azote;
- besoins en ions minéraux, en facteurs de croissance;
- pH et force ionique voisins de la valeur optimum.
Il peut se présenter sous forme liquide ou solide, par addition d'agar ou gélose, de gélatine,
d’œuf entier coagulé ou de Gel de silice.
3.2 Procédure
- Mesurer la masse nécessaire de poudre et d'éventuels additifs,
- Mettre les poudres en suspension dans un volume de diluant inférieur au volume
nécessaire,
- Chauffer pour dissoudre si nécessaire en agitant (à ébullition en général),
- Ajouter le complément de diluant,
- ajuster le pH par addition de NaOH ou HCl à 1 ou 0,1 mol.dm
-3 à l'aide d'un pHmètre, sauf si le fabricant indique le contraire,
- Conditionner, en prenant garde à la solidification d'un milieu contenant de l'agar
et en respectant les contraintes de volumes pour certains milieux.
- Stériliser, éventuellement à l'autoclave ou par filtration, assez rapidement après
la fabrication.
3.3 La composition des milieux de culture utilisés
3.3.1 Les coliformes totaux et fécaux
Géloses lactosées au TTC et Tergitol (RODIERet al., 2009)
extrait de viande …………….5 g/l
Peptone …………………….10 g/l
extrait de levure ……………6 g/l
Lactose……………………… 20 g/l
bleu de bromothymol …………….0,05 g/l
Agar ……………………………….20 g/l
3.3.1.1 Le milieu de Schubert
Composition
- Peptone ……………………………………………………….10,00 g/l