Chapitre II
MATERIEL ET METHODES
31
4.5 La recherche des Salmonelles et les Vibrions
La recherche des Salmonelles et des Vibrions est effectuée par la méthode qualitative,
réalisée en trois étapes successives: enrichissement, isolement et identification biochimique
(RODIER et al, 1996).
4.5.1 Recherche des salmonelles
 Principe
La recherche de Salmonella a été faite en 4 étapes selon la norme ISO 6579: le préenrichissement, l'enrichissement, l'isolement et l’identification biochimique dans le cas de la
suspicion de la présence de Salmonelle.
On procède pour la recherche des salmonelles à deux enrichissements successifs, le premier, un
pré-enrichissement sur milieu EPT (Eau Peptonée Tamponnée) et le second,un enrichissementsur
milieuSFB simple et double concentré avec l’ajout de l’additif SFB. L’isolement est réalisé sur
milieu Hektoen et/ou sur milieu SS (gélosé salmonelles-Shigelles). (figure II.7)
 Mode opératoire
 Pré-Enrichissement
Ensemencement d’un milieu liquide non sélectif avec l’échantillon à analyser, puis incubation à
37 °C (RODIER et al, 1996)
- Filtrer 1l de l’échantillon à analyser ;
- Mettre la membrane filtrante dans 100ml du milieu liquide EPT qui favorise la
croissance des bactéries ;
- Incuber à l’étuve 37°C pendant 24heures.
 Enrichissement
Ensemencement de deux milieux liquides sélectifs à partir du bouillon de pré-enrichissement
puis incubation à 37 °C ou 42-43 °C (RODIER et al, 1996)
À partir du pré-enrichissement
- on procède à un enrichissement sur milieu SFB (qui favorise le développement
des Salmonelle, en inhibant la croissance des entérocoques et des autres
bactériesenterique, en ensemençant 1ml sur SFB S/C et 10ml sur SFB D/C ;
- ajouter 2 disques SFB pour le (D/C) et 1 disque SFB pour le (S/C) ;
- incuber à 37 °C pendant 18 à 24h heures.