Chapitre II
MATERIEL ET METHODES
29
4.4 Dénombrement des Staphylocoques
 Pour S. aureus, il s’agit d’incuber la membrane filtrante sur la gélose chapman pendant
24h à 37°C. Dans ces à conditions, les S. aureus qui fermentent le mannitol apparaissent
sous forme de colonies de1,0 mm à 1,5 mm, convexes, jaunes, brillantes et lisses.
(RAMADE, 2000) (Figure II.6).
 Mode opératoire
- filtrer un volume de 100ml d'échantillon ou des dilutions;
- déposer la membrane filtrante quadrillée sur la gélose Chapman;
- incuber à l’étuve à 37°C pendant 24h ;
- Sur Chapman,Staphylococcus aureus se présente sous forme de colonies de taille
moyenne, lisses, brillantes, pigmentées en jaune ;
- Le nombre de colonies trouvées est exprimé en Unité Formant Colonie dans 100 ml
d’eau analysée (UFC/100ml).
 Confirmation de l’identification
La confirmation de l’identification des S. aureus pathogène a été effectuée par les tests suivants
qui seront détaillés plus loin : coloration de Gram, test de catalase et test de la coagulase.
 Test de la coagulase
Ce test détecte la présence d’une enzyme « la coagulase » qui coagule le plasma en formant des
cailloux. Le résultat positif indique une suspicion de présence de S.aureus.(coagulase +)
 Mode opératoire
Dans un tube à hémolyse stérile, introduire 4 gouttes de plasma de lapin réhydraté et y introduire
5 colonies suspectes, puis incuber la suspension bactérienne à 37°C pendant 24h. Des lectures
doivent être effectuées toutes les heures au moins pendant les cinq premières heures, ainsi
qu’après 24 heures pour observer la coagulation éventuelle du plasma.