Matériels et Méthodes
39
2.6.1.1. Fixation des échantillons
Les échantillons d’eau prélevées, ont été immédiatement fixés avec du Lugol neutre (10 à
15 gouttes pour 250 ml d’eau de mer), de manière à obtenir une coloration légèrement
brune. La fixation permet d’éviter la multiplication des microalgues ou leur détérioration.
Les échantillons sont conservés à l’abri de la lumière, afin d’éviter la décoloration des
échantillons fixés.
2.6.1.2. Concentration des organismes par sédimentation
Avant de procéder à cette étape selon le protocole d’Utermohl, il est nécessaire
d’homogénéiser tous les échantillons en agitant les flacons lentement (une cinquantaine de
fois) afin de remettre en suspension les cellules qui se sont déposées sur le fond du flacon
ou accolées aux parois (Illoul, 1991). Après l’agitation, on transvase 50 ml de l’échantillon
dans une chambre de sédimentation combinée (cuve surmontée d’un cylindre) qu’on
remplit délicatement (Margalef, 1969 in Hasle, 1978 in Illoul, 1991) pour éviter les bulles
d’air.
Puis, on place une plaque de verre au sommet du cylindre, et on les place dans une surface
horizontale et en lumière atténuée.
Temps de sédimentation
La durée de sédimentation est proportionnelle à la hauteur, de la chambre de
sédimentation, cette durée a été estimée à 3 heures par cm de hauteur (Margalef,
1969 in Hasle, 1978). L’aliquote de 50 ml mis à sédimenter dans la chambre de
sédimentation haute de 10 cm une trentaine d’heure.
Après la sédimentation, le surnageant est enlevée en faisant glisser le tube supérieur
de la cuve à l’aide d’une spatule mince.
2.6.1.3. Comptage des cellules
L’observation des cellules est réalisée avec un microscope inversé de type ZEISS modèle
IM35.
Les cellules sont identifiées jusqu’au niveau d’espèces quand cela est possible en utilisant
les ouvrages de systématique suivant : Gerhard Drebes, 1974 ; Lizeth Botes, 2001 ; Ricard,
39
2.6.1.1. Fixation des échantillons
Les échantillons d’eau prélevées, ont été immédiatement fixés avec du Lugol neutre (10 à
15 gouttes pour 250 ml d’eau de mer), de manière à obtenir une coloration légèrement
brune. La fixation permet d’éviter la multiplication des microalgues ou leur détérioration.
Les échantillons sont conservés à l’abri de la lumière, afin d’éviter la décoloration des
échantillons fixés.
2.6.1.2. Concentration des organismes par sédimentation
Avant de procéder à cette étape selon le protocole d’Utermohl, il est nécessaire
d’homogénéiser tous les échantillons en agitant les flacons lentement (une cinquantaine de
fois) afin de remettre en suspension les cellules qui se sont déposées sur le fond du flacon
ou accolées aux parois (Illoul, 1991). Après l’agitation, on transvase 50 ml de l’échantillon
dans une chambre de sédimentation combinée (cuve surmontée d’un cylindre) qu’on
remplit délicatement (Margalef, 1969 in Hasle, 1978 in Illoul, 1991) pour éviter les bulles
d’air.
Puis, on place une plaque de verre au sommet du cylindre, et on les place dans une surface
horizontale et en lumière atténuée.
Temps de sédimentation
La durée de sédimentation est proportionnelle à la hauteur, de la chambre de
sédimentation, cette durée a été estimée à 3 heures par cm de hauteur (Margalef,
1969 in Hasle, 1978). L’aliquote de 50 ml mis à sédimenter dans la chambre de
sédimentation haute de 10 cm une trentaine d’heure.
Après la sédimentation, le surnageant est enlevée en faisant glisser le tube supérieur
de la cuve à l’aide d’une spatule mince.
2.6.1.3. Comptage des cellules
L’observation des cellules est réalisée avec un microscope inversé de type ZEISS modèle
IM35.
Les cellules sont identifiées jusqu’au niveau d’espèces quand cela est possible en utilisant
les ouvrages de systématique suivant : Gerhard Drebes, 1974 ; Lizeth Botes, 2001 ; Ricard,