Chapitre 3
Matériels et méthodes
50
3.2.2.2. Matériel utilisé
Auto-Analyzer SAN plus System de marque SKALAR®, 1998;
Bi-distillateur MILLI-Q® Reagent Water System ;
Des micropipettes Fortuna ® avec éjecteur d’embouts de type DIGITAL , une de 200 à
1000 µl et l’autre de 20 à 250 µl.
des fioles de 100 et 500 ml ;
Balance, Spatule, entonnoir et bécher et la hôte.
3.2.2.3. Analyse automatique des sels nutritifs
a. Dosage des nitrites
Les nitrites (NO2
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide pH<2.
Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé azoïque de
couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (BENSCHNEIDER ET ROBINSON, 1952)
b. Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO3
-
) en nitrites (NO2
-
) par le passage
de l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (WOOD ET AL,
1967). Les nitrites (en réalité NO2
- + NO3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon
la méthode précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (RODIER ET AL. 1996).
c. Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bainmarie), les ions orthophosphates (PO4
-3 ) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour
former un complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique
(MURPHY ET RILEY, 1962). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum
d’absorption à 880 nm.
d. Dosage de l’ammonium (NH4 + )
Le constructeur SKALAR a adapté la procédure automatisé pour la détermination de
l’ammonium pour l’analyse de l’eau de mer, qui est basé sur la réaction de (BERTHELOT
1859 MODIFIEE PAR THE). Elle s’applique à des concentrations allant de 2 à 1100ppb N.
En milieu alcalin (8 < pH <11.5), l’ammonium dissous réagit sur l’hypochlorite pour former un
monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d’un excès d’hydrochlorite (milieu
oxydant) donne lieu à la formation d’un bleu indophénol. Après oxydation un composé coloré
vert est formé. La réaction de thé est catalysée par le nitroprusside de sodium. Le composé
Matériels et méthodes
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3.2.2.2. Matériel utilisé
Auto-Analyzer SAN plus System de marque SKALAR®, 1998;
Bi-distillateur MILLI-Q® Reagent Water System ;
Des micropipettes Fortuna ® avec éjecteur d’embouts de type DIGITAL , une de 200 à
1000 µl et l’autre de 20 à 250 µl.
des fioles de 100 et 500 ml ;
Balance, Spatule, entonnoir et bécher et la hôte.
3.2.2.3. Analyse automatique des sels nutritifs
a. Dosage des nitrites
Les nitrites (NO2
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide pH<2.
Ce composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé azoïque de
couleur rose absorbant la lumière à 540 nm (BENSCHNEIDER ET ROBINSON, 1952)
b. Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO3
-
) en nitrites (NO2
-
) par le passage
de l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (WOOD ET AL,
1967). Les nitrites (en réalité NO2
- + NO3
- réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon
la méthode précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites
déterminés directement (sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver
les concentrations des nitrates (RODIER ET AL. 1996).
c. Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bainmarie), les ions orthophosphates (PO4
-3 ) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour
former un complexe antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique
(MURPHY ET RILEY, 1962). Cette forme réduite de coloration bleue a un maximum
d’absorption à 880 nm.
d. Dosage de l’ammonium (NH4 + )
Le constructeur SKALAR a adapté la procédure automatisé pour la détermination de
l’ammonium pour l’analyse de l’eau de mer, qui est basé sur la réaction de (BERTHELOT
1859 MODIFIEE PAR THE). Elle s’applique à des concentrations allant de 2 à 1100ppb N.
En milieu alcalin (8 < pH <11.5), l’ammonium dissous réagit sur l’hypochlorite pour former un
monochloramine. Ce composé, en présence de phénol et d’un excès d’hydrochlorite (milieu
oxydant) donne lieu à la formation d’un bleu indophénol. Après oxydation un composé coloré
vert est formé. La réaction de thé est catalysée par le nitroprusside de sodium. Le composé